Secreción de EVs por tripomastigotes sanguíneos de Trypanosoma cruzi como mecanismo de evasión del sistema inmune.

CAEIRO, L; TEKIEL, V

Buenos Aires

Workshop; 1° Workshop Anual del Grupo Argentino de Vesículas Extracelulares (GAVE).; 2023

Grupo Argentino de Vesiculas Extracelulares (GAVE)

SECRECIÓN DE EVs POR TRIPOMASTIGOTES SANGUÍNEOS DE Trypanosoma cruzi COMO MECANISMO DE EVASIÓN DEL SISTEMA INMUNE. El tripomastigote (tryp) es el estadio sanguíneo circulante de Trypanosoma cruzi, el agente etiológico de la enfermedad de Chagas. Durante la infección in vivo los tryp circulantes (BloodTryp) están adaptados para sobrevivir en circulación, evadir el sistema inmune y establecer la infección. Sin embargo, la mayor parte de los estudios se realizan con tryp derivados de células in vitro (CulTryp), muy ineficientes para establecer infecciones in vivo. En el presente trabajo realizamos un análisis proteómico comparativo de BloodTryp, CulTryp y sus EVs, de una cepa de T. cruzi muy virulenta. Los BloodTryp fueron purificados a partir de sangre de animales infectados, y las EVs obtenidas por shedding (6 hs, 37ºC) y ultracentrifugación (100000xg; 16 hs). El mismo procedimiento se realizó con sangre de animales no infectados (control), CulTtryp y sus EVs. Cada condición fue procesada por triplicado en un Q Exactive HESI-Orbitrap acoplado a nano HPLC Easy-nLC 1000 (CEQUIBIEM, FCEyN, UBA). Los datos crudos se analizaron contra bases de datos de T. cruzi y Mus musculus, con PatternLab for Proteomics. De las proteínas identificadas en las muestras in vitro, 305/1210 fueron compartidas entre CulTryp y EVs; el término más frecuente en las exclusivas de EVs fue “pathogenesis” (GO analysis). Entre BloodTryp y sus EV sólo se encontró un núcleo menor de proteínas compartidas (18/117); la mayor parte de proteínas de T. cruzi identificados en EVs de BloodTryp fueron factores de virulencia y/o relacionadas con la evasión del sistema inmune (TS grupo II y V, GP63). Por otro lado, entre las proteínas de ratón identificadas solamente en EVs, se encontraron mayoritariamente proteínas relacionadas con el sistema inmune (complemento (23/97) [vía clásica, altenativa y lectinas] y anticuerpos (41/97)), indicando que los BloodTryp estarían sheddando proteínas de ratón a través de la secreción en EVs, para evadir la acción del sistema inmune. Además, identificamos marcadores de EVs de mamíferos en BloodTryp (70/139), lo que sugiere una posible comunicación interespecie mediante EVs y/o la evasión del sistema inmune por mimetismo molecular. En conjunto, este trabajo nos permitió identificar nuevos factores de virulencia y potenciales blancos de intervención, y entender mejor la biología de T. cruzi y su interacción con el hospedador in vivo.