Las proteínas de superficie TcTASV-C de tripomastigotes de Trypanosoma cruzi se secretan mayoritariamente en vesículas pequeñas

CAEIRO, LUCAS; SÁNCHEZ, DO; TEKIEL, V

Buenos Aires

Congreso; XXVII Reunión Anual de la Sociedad Argentina de Protozoología; 2015

Sociedad Argentina de Protozoología

La familia multigénica TcTASV está conservada en los diferentes linajes de T. cruzi y no posee ortólogos en otros organismos. De acuerdo a la longitud, secuencia y motivos de la región central de los productos proteicos se definen 4 subfamilias. La subfamilia TcTASV-C, compuesta por aproximadamente 15 genes, se expresa en la superficie de tripomastigotes, se secreta al medio e interactúa con células de mamífero. Previamente hemos determinado que los tripomastigotes expresan simultáneamente más de un gen TcTASV-C y que los productos secretados difieren de los expresados en la superficie del tripomastigote. Como la vía de secreción puede determinar la funcionalidad de una proteína, en este trabajo estudiamos el mecanismo de secreción de TcTASV-C. Para ello, incubamos tripomastigotes in vitro durante 6 horas, y luego separamos los parásitos (pellet) del sobrenadante, que contiene vesículas de distintos tamaños y productos que se secretan libres. Este sobrenadante fue ultracentrifugado primero 2 hs a 100.000 g para purificar vesículas grandes (100 a 300 nm) y luego 16 hs para obtener las vesículas pequeñas (50 a 100 nm) en el pellet y productos libres en el sobrenadante. Las distintas fracciones fueron analizadas por western blot. TcTASV-C se secretó mayoritariamente en vesículas pequeñas, pero también pudimos detectarla, en mucho menor medida, en el resto de las fracciones. En paralelo, también analizamos el perfil de secreción otras proteínas de T. cruzi (HSP70, GDH, SR62, etc). En resumen, TcTASV-C se secretaría principalmente en microvesículas, también llamadas ectosomas, que se forman a partir del shedding de la membrana celular y cuyo origen es diferente del de las vesículas más grandes, denominadas exosomas, que se generan a partir de endosomas tardíos fusionados con la membrana plasmática. La co-secreción de TcTASV-C en ectosomas con determinados productos de tripomastigotes, sería importante para la función de TcTASV-C en la infección con T. cruzi.