Adecuación del método de análisis de Dialliltiosulfinato en polvo de ajo (Alllium sativum L), mediante HPLC

CAMARGO, ALEJANDRA; BUENANUEVA, ANDREA

Cartajena de Indias, Colombia

Congreso; IX Congreso Latinoamericano de Cromatografía y Técnicas Afines (COLACRO), 3º Congreso Colombiano de Cromatografía; 2002

Cuando se produce algún daño en el tejido de los bulbos, se ponen en contacto los cisteín sulfóxidos entre ellos la alliina, que se halla en el citosol con una enzima allinasa presente en las vacuolas celulares, para sintetizar  los tiosulfinatos,  de los cuales la allicina (diallil tiosulfinato) es la que se encuentra en mayor proporción. En los primeros estudios de este compuesto se evaluaron sus propiedades como bactericida y fungicida, también se le atribuyen efectos antimutagénicos, entre otros. Desde entonces ha sido considerada uno de los compuestos biológicamente activos más importantes producidos por el ajo, motivando un amplio campo de investigación en esta dirección. Debido a sus propiedades funcionales, es que se comercializan variados subproductos de ajo con fines terapéuticos que son caracterizados en su contenido de allicina. En el presente trabajo se adecuó el método propuesto, con mínimas modificaciones. La técnica analítica se basa en pesar un gramo del polvo de ajo, se reconstituye con 30 ml de agua se deja reposar durante 10 minutos. Luego, se toma un mililitro y se centrifuga a 14.000 rpm, 5 minutos. Una alícuota del sobrenadante se diluye a la mitad con metanol y se centrifuga nuevamente en las mismas condiciones. Posteriormente se procede al análisis mediante Cromatografía Líquida de Alta Resolución (HPLC). El equipo está acoplado a detector ultravioleta con longitud de onda a 254 nm, se emplea una columna de fase reversa RP- ODSC18 de 5 µM de tamaño de partícula. Como fase móvil se emplea mezcla de metanol: agua (50:50), flujo de 1 ml /minuto. Debido a la inestabilidad de la allicina, no se dispone de estándares para la cuantificación, por eso se adicionan cantidades conocidas de alliina (precursor) a un extracto de ajo. Se cuantifican muestras del extracto de ajo solo y con el agregado de distintas concentraciones de alliina y con ello se construye una curva de calibración. Para adecuar el método se realizaron los siguientes ensayos: se evaluó la disminución de la concentración de allicina en el tiempo, con el fin de conocer las potenciales pérdidas del analito durante los tiempos de análisis. Para este fin se seleccionaron dos medios lo cuales corresponden a dos etapas durante la preparación de la muestra agua (100%) y metanol:agua (50%). Se realizaron curvas de calibración y se evaluó la precisión del método mediante el análisis de 12 muestras, realizando 5 repeticiones de cada una. De los experimentos realizados podemos concluir que resulta conveniente analizar rápidamente las muestras luego de su preparación. La concentración de allicina en un medio con metanol:agua (50%), puede disminuir hasta un 20% luego de 1,5 horas. Las curvas de calibración fueron probadas en un rango de 80 a 400 mg/ml de allicina,  arrojando valores de r2 mayores a 0,91. El coeficiente de variación promedio de todas las determinaciones fue del 5,4 %, lo que se puede considerar adecuado considerando la naturaleza biológica de las muestras.