Caracterización de un cepario de levaduras para uso enológico mediante técnicas moleculares

SANCHEZ M.L.; CHIMENO V.; MERCADO L.; COMBINA M.; PALADINO S.; MAZA M.; BERNARDI M.; FIGUEROA C.; FARRANDO S.

Buenos Aires

Congreso; XIII Congreso Argentino de Microbiología y XX Congreso de Microbiología Aplicada y Ambiental.; 2013

Asociación Argentina de Microbiología

Saccharomyces cerevisiae es reconocida como la levadura vinica por excelencia. La Facultad de Ciencias Agrarias de la Universidad Nacional de Cuyo posee una coleccion de levaduras vinicas conformada por 445 cepas provenientes de Departamentos de importancia vitivinicola como Lujan de Cuyo, Tupungato, Maipu, San Martin, Junin y Rivadavia. El objetivo de esta colección es disponer de material para su uso de acuerdo a diferentes objetivos enologicos, para lo cual se requiere tener una amplia informacion respecto de las diferentes caracteristicas de las cepas que integran la misma. Los microorganismos aislados fueron identificados por sus caracteristicas fenotipicas (formacion de esporas y crecimiento en agar lisina), caracterizados desde el punto de vista tecnologico (formacion de pelicula, anillo o sedimento, resistencia al alcohol, resistencia al SO2, cineticas de fermentacion, formacion de espuma) y por sus caracteristicas cualitativas (formacion de acido a partir de la glucosa, produccion de H2S, actividad beta-glucosidasa). Los resultados obtenidos fueron analizados para seleccionar individuos en funcion de objetivos particulares. En base a esta caracterizacion las cepas fueron agrupadas por su semejanza y se seleccionaron representantes para ser estudiados mediante tecnicas moleculares con el objeto de lograr su identificacion y alcanzar un conocimiento profundo de los microorganismos que integran la coleccion. Para esto se realizo la extraccion de ADN total mediante metodologia quimica utilizando fenol/cloroformo/isoamilico según la tecnica de Hoffman, C. S. y Winston, F. A. 1987 modificada y se verifico la calidad del ADN por electroforesis en gel de agarosa 1% (TE) sometidos durante 60 minutos a 90 voltios y tenidos con bromuro de etidio para su posterior visualizacion con luz UV. Luego se utilizo la tecnica de diferenciación intraespecifica para Saccharomyces cerevisiae PCR Interdelta, Legras, J.L. And Karst, F. (2003). Los productos de la reaccion fueron analizados mediante electroforesis en geles de agarosa 1,2% en TBE 0.5X sometidos durante una hora a 90 voltios y tenidos con bromuro de etidio para su posterior visualizacion con luz UV. Los primeros resultados de este estudio, todavía en proceso, mostraron que las cepas evaluadas respondieron a la tecnica de amplificacion para el mencionado genero y especie y mostraron un perfil de bandas similares entre si en concordancia con la similitud en sus caracteristicas tecnologicas y cualitativas