Extracción rápida y eficiente de ADN de levaduras enológicas: evaluación de dos métodos

MIRAS, SILVANA; MASSERA, ARIEL; MERCADO, LAURA; STURM, MARÍA ELENA; COMBINA, MARIANA

Mar del Plata

Congreso; VI Congreso Latinoamericano de Micología.; 2008

Asociación Latinoamericana de Micología

Diferentes herramientas de biología molecular se utilizan en la identificación de especies de levaduras involucradas en la producción de vino. El paso inicial en estas metodologías es la extracción del ADN, el cual debe proveer material adecuado para procedimientos posteriores. El objetivo del presente trabajo fue evaluar metodologías para extracción de ADN de levaduras enológicas. Se utilizaron 6 cepas de referencia Saccharomyces y no-Saccharomyces, las cuales fueron crecidas en YPD líquido en distintas condiciones: 24, 48 y 72 hs en tubo de ensayo y/o Erlenmeyer. Se efectuaron extracciones por triplicado aplicando dos técnicas: extracción mecánica/química con perlas de vidrio con fenol y extracción mediante lisis enzimática. Se realizó la cuantificación de ADN con espectrofotómetro y por densitometría en geles de agarosa. La cuantificación en geles fue rápida y fácil de realizar rutinariamente, pero menos sensible respecto al espectrofotómetro. La extracción mecánica/química mostró resultados óptimos con mínimas cantidades de proteína y ARN, siendo el tiempo de cultivo de 48 hs en tubo el más uniforme cuantitativa y cualitativamente. La extracción enzimática presentó mayor variabilidad y resultados óptimos en cultivos de 72 hs en tubo, pero la calidad del ADN fue inferior al otro método. El ADN extraído permitió realizar reacciones de PCR con elevado éxito de amplificación para las distintas especies evaluadas.