Insulina induce cambios a nivel transcripcional y post-traduccional en la expresión de receptores GABA-A en células Jurkat

DIONISIO L; CHRESTIA F; BOUZAT C; ESANDI MC

Congreso; LVIII Reunión Anual de la Sociedad Argentina de Investigación Clínica (SAIC).; 2014

Previamente hemos descripto la presencia de receptores ionotrópicos de GABA en la línea celular de linfocitos T, Jurkat. Estos receptores presentan características similares a los receptores neuronales, tales como la modificación de la expresión de subunidades frente a diferentes estímulos como GABA y progesterona. Por otro lado, en neuronas se ha descripto que insulina induce un rápido reclutamiento de estos receptores a membrana a través de la activación de la vía de Akt y la fosforilación de subunidades β. El objetivo de este trabajo es determinar el efecto de insulina sobre la expresión de receptores de GABAA en linfocitos. Para ello, células Jurkat fueron expuestas a insulina 0,5 µM durante 15 y 40 h y se evaluó mediante RT-qPCR cambios en la expresión del ARNm de subunidades del receptor. Luego de 15 h de incubación con insulina, se detectó un incremento y una disminución del ARNm correspondiente a las subunidades β3 y α1 respectivamente. Por otro lado, se evaluó si insulina inducía cambios rápidos en la expresión de receptores en membrana. Se expuso a células Jurkat durante 10 minutos a insulina y luego se realizó una tinción immunofluorescente de los receptores de superficie utilizando un anticuerpo contra la subunidad β3. Se observó un incremento de la tinción específica de membrana para dicha subunidad luego de la incubación con la droga. Durante este tiempo, los niveles de ARNm de dicha subunidad no fueron alterados, sugiriendo que insulina, induce en células Jurkat, al igual que en neuronas, una rápida translocación a membrana de los receptores GABAA sin afectar la transcripción de genes. Nuestros resultados demuestran dos efectos temporalmente separados de insulina en la expresión de receptores de GABAA en células Jurkat: uno lento, que consiste en la modificación de la expresión de subunidades a nivel de ARNm; otro rápido, post-traduccional en el que la subunidad β3 sería fosforilada aumentando la translocación de receptores a membrana.