Caracterización funcional de receptores nicotínicos en neuronas amacrinas de retina de rata

GUMILAR F; POLITI L; CECILIA BEATRIZ BOUZAT

Buzios

Congreso; I congreso IBRO/LARC de Neurociencias de América Latina, Caribe y Península Ibérica. Neurolatam; 2008

En la retina de vertebrados, las neuronas amacrinas modulan las interacciones laterales entre las células bipolares y ganglionares. Los sistemas colinérgicos presentes en estas neuronas participan de esta modulación a través, en parte, de la activación de receptores nicotínicos neuronales (AChRs). Sin embargo la caracterización de los AChRs en las neuronas amacrinas y sus posibles funciones durante el desarrollo de la retina no han sido establecidas. Objetivos: Identificar funcionalmente subtipos de AChR neuronales en células amacrinas en cultivo y determinar sus efectos sobre el crecimiento de neuritas durante la activación o bloqueo de dichos receptores. Métodos: Realizamos registros de corrientes macroscópicas en neuronas amacrinas a distintos tiempos de su desarrollo. Identificamos las neuronas por su morfología y por técnicas de microscopia de fase e inmunocitoquímicas utilizando el anticuerpo monoclonal HPC1. Utilizamos microscopia confocal y la sonda fluorescente Fluo-3/AM para evidenciar influjo de Ca2+. Resultados: Por medio de marcación con alfa-bungarotoxina demostramos la presencia del receptor nicotínico alfa7 en la superficie de células amacrinas. A tiempos tempranos del desarrollo no observamos corrientes activadas por agonistas en las células amacrinas. Una vez que las neuronas alcanzaron un avanzado proceso de diferenciación, observamos dos tipos de respuestas: una lenta, evidenciada por corrientes con constante de decaimiento del orden de 70 ms y otra rápida del orden de 10 ms. Esta última podría corresponder al receptor alfa7. Debido a que éste es altamente permeable a iones Ca2+, utilizamos Fluo-3/AM para evidenciar su actividad. La activación con nicotina o ACh reveló el ingreso de Ca2+ a células amacrinas. El bloqueo con alfa-BTX inhibió la señal, indicando la presencia de receptores alfa7 funcionales. El agregado de nicotina a los cultivos neuronales indujo un aumento significativo en el largo de neuritas con respecto a los cultivos control. Conclusión: Los resultados muestran que las neuronas amacrinas presentan al menos dos subtipos de receptores nicotínicos funcionales sugiriendo un rol de estos receptores durante el establecimiento de la sinaptogénesis en la retina.