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El receptor de serotonina tipo 3A (5-HT3AR) es un homopentámero perteneciente a lafamilia de receptores Cys-loop. Cada subunidad está formada por 4 segmentostransmembranales (M1-M4). M2 forma el poro iónico y M4 es el más externo, encontacto con la membrana. La baja conductancia del canal iónico ha impedido el estudiode este receptor usando la técnica de patch-clamp. Utilizando un mutante del 5-HT3ARde alta conductancia describimos con detalle la activación a nivel de canal único. Loseventos de activación aparecen como aperturas sucesivas separadas por cierres breves.Los histogramas de tiempos de estado abierto son ajustados con tres componentes:breve (~150 µs), intermedio (1-3 ms) y prolongado (~120 ms). Los registros decorrientes macroscópicas muestran que este receptor se activa por serotonina con unaEC50 de 2 µM y se desensibiliza lentamente. Para evaluar el rol de M4 mutamos lasposiciones 10? y 14? y analizamos los cambios funcionales. Las mutaciones en 10?disminuyen ~3 veces el componente de estado abierto de mayor duración, sin afectar lavelocidad de desensibilización. Las mutaciones en 14? no producen cambiossignificativos en los tiempos de estado abierto y cerrado del canal, pero aumentan ~3veces la velocidad de desensibilización. Así, M4 contribuye a la cinética de activación ydesensibilización del receptor. Estudiamos además la acción de esteroides que modulanla actividad de otros receptores de la misma familia y para los cuales M4 podría ser elsitio de acción. Los registros de canales en presencia de hidrocortisona muestran unadisminución significativa del tiempo de estado abierto y de los períodos de activación,compatible con un bloqueo lento o aumento de la velocidad de desensibilización. Losresultados revelan un alto grado de conservación entre miembros de esta familia dereceptores en cuanto al rol funcional del segmento M4 y la modulación por esteroides.

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