Optimización por calibración multivariada de hidrolisis acida por microondas de proteínas, aplicada a la determinación de selenoaminoácidos en muestras de leche ovina

LÓPEZ R., ESCUDERO L. A., CERUTTI S., PACHECO P.

Río Cuarto

Congreso; 9° Congreso Argentino de Química Analítica; 2017

Asociación Argentina de Químicos Analíticos

El Selenio es un elemento traza esencial en la dieta humana. Tiene un papel relevante en la respuesta inmunológica como agente antioxidante, retrasando la posibilidad de contraer cáncer. El selenio forma parte de los conocidos Se-aminoácidos, constituyentes de Se-proteínas con funciones enzimáticas. Para el análisis cuantitativo de dichos aminoácidos, se utiliza la cromatografía líquida de alta performance acoplado a espectrometría de masas (LC-ICP MS). Sin embargo previo análisis de los mismos, es necesaria la hidrolisis proteica. Durante este proceso, trabajar con condiciones muy enérgicas, puede derivar en la oxidación los Se-aminoácidos. Por este motivo se adiciona Ditiotreitol (DTT), un potente agente reductor que evita la oxidación de los mismos. Por otro lado, condiciones muy suaves, pueden conducir a una liberación no cuantitativa de los mismos. Acorde a lo mencionado, es necesario establecer condiciones óptimas de hidrólisis de proteínas para el análisis de Se-aminoácidos. El presente estudio propone la determinación de Se-aminoácidos en muestras de leche ovina, mediante la hidrolisis acida de proteínas asistida por microondas y posterior determinación por LC-ICP MS. Mediante un diseño central compuesto se evaluaron las siguientes variables: concentración del ácido, concentración del antioxidante (DTT), el tiempo de digestión y potencia de microondas. Mediante la aplicación de diseño factorial se determinó que tanto la concentración del ácido como la de antioxidante son variables significativas en la hidrolisis, como así también la potencia de microondas. Estas variables resultaron ser las más influyentes en el sistema. Finalmente, la optimización a partir de un diseño central compuesto indicó que los valores óptimos de los mismos son: 558uL de ácido clorhídrico al 35%, 356 watt de potencia microonda y 10,14uL de DTT, para concentraciones de azufre entre 152,85 y 156,39 ppm, siendo el azufre un indicador de la concentración de proteínas. Esta optimización permitió disminuir el tiempo de análisis y el volumen de reactivos. La metodología propuesta alcanza una precisión de 7.8%. El límite de detección (DL) corresponde a 0,53 ug/L y el límite de cuantificación (LQ) a 1,59 ug/L. El método se aplicó a la determinación de Se-aminoácidos en muestras de leche ovina. Las concentraciones halladas variaron en el siguiente rango de concentraciones: 5,21-17,59 µg/L de Se-cisteína. Se-Metil-Se-cisteína y Se-metionina no fueron detectados en estas muestras con el procedimiento propuesto.