DETERMINACIÓN DE OCRATOXINA A EN CERVEZA EMPLEANDO QuEChERS ASOCIADO A UPLC ACOPLADO A ESPECTROMETRÍA DE MASAS EN TANDEM

L. MARIÑO REPIZO; F. KERO; V. VANDELL; A. SENIOR; S. CERUTTI; J. RABA

Los Cocos, Córdoba

Congreso; II Congreso Argentino de Espectrometría de Masas; 2014

Sociedad Argentina de Espectrometría de Masas

Ocratoxina A (OTA) es un metabolito secundario de los hongos Penicillium y Aspergillus, los cuales pueden aparecer en distintos cereales y en sus productos1. Según la Agencia Internacional para la Investigación del Cáncer (IARC), OTA representa un alto riesgo para la salud debido a sus efectos nefrotóxicos, hepatóxicos, neurotóxicos, inmunotóxicos y teratogénicos2; además de que su estabilidad frente a condiciones de acidez y de temperaturas elevadas dificulta su completa remoción en alimentos. En este contexto, se ha identificado a la cerveza como uno de los contribuyentes más significativos de OTA en la dieta3. Es así que con el fin de monitorear OTA y, si bien, autoridades internacionales no han establecido un nivel máximo permitido de esta toxina en cerveza, su concentración deber ser menor a 2 μg/L en todos los subproductos de trigo y cebada 3. En consecuencia, la determinación sensible y precisa de OTA en una muestra compleja como lo es la cerveza es imperativa a fin de garantizar su calidad alimentaria para el mercado nacional e internacional. En el presente trabajo, se desarrolló un metodología basada en cromatografía líquida de ultra elevada resolución (UPLC) en fase reversa acoplada a una fuente de ionización por electrospray, configurada en modo de polaridad positivo, con detección por espectrometría de masa en tándem (MS/MS) para el análisis de OTA en cervezas artesanales y comerciales, de diversas variedades y de procedencia nacional e internacional. El tratamiento de la muestra consistió en dos etapas: extracción (salting-in) y limpieza del analito por medio del uso de una fase sólida dispersiva (dSPE), de acuerdo a la metodología Quick, Easy, Cheap, Effective, Rugged, and Safe (QuEChERS). De esta forma, se evaluaron las variables involucradas en las etapas de extracción y de limpieza: (i) optimización de las sales y aditivos extractantes, seguido de (ii) adición de un material sorbente (Alúmina, C18, GPC, PSA, sílica gel) en la etapa de clean-up. La separación cromatográfica se realizó en una columna C18, el tiempo total de corrida cromatográfica fue de 2.0 minutos, siendo el tiempo de retención de OTA de 0.57 min. Para la detección por MS/MS, se empleó el modo de monitoreo de reacción múltiple para tres transiciones: 404.1>358.2 (confirmación); 404.1>341.1 (confirmación); y 404.1>239.1(mayor sensibilidad, cuantificación). El límite de cuantificación obtenido para muestras de cerveza fue menor a 2 μg/L Junto a la caracterización analítica de la metodología, se evaluó la influencia de la supresión iónica de la matriz de la muestra sobre la señal de OTA. Los resultados observados permiten concluir que el método propuesto es sensible, selectivo, reproducible y adecuado para el monitoreo de OTA en muestras de cerveza.