Nuevos péptidos con actividad antimicrobiana identificados en la piel de la rana patagónica Pleurodema somuncurense. Caracterización de su mecanismo de acción

CANCELARICH, NATALIA L.; PÉREZ, LUIS O.; MOREIRA, CARNEIRO D; BARBOSA, EDER ALVES; AGUILAR, SILVANA; BASSO, NÉSTOR G.; SOUSA A. L. JOSÉ ROBERTO; FANINI, LAURA; WILKE, NATALIA; MARANI, MARIELA,M.

Córdoba

Jornada; VIII Jornadas de Posgrado y II Jornadas de Ciencia y Tecnología de la Facultad de Ciencias Químicas; 2018

El potencial de los péptidos antimicrobianos (PAMs) como alternativa a las terapias convencionales es bien reconocido. La comprensión de las propiedades biológicas y biofísicas de los PAMs es, por lo tanto, clave para comprender su modo de acción.El objetivo de este trabajo fue la identificación de PAMs de la piel de la rana patagónica Pleurodema somuncurense y la caracterización de su mecanismo de acción mediante el estudio de la interacción y actividad permeabilizante con membranas modelo.Se extrajo el ARN total a partir de la piel de un ejemplar de P. somuncurense y se obtuvo el ADNc utilizando primers específicos. Los productos de PCR se purificaron, transfectaron y clonaron en células competentes. Los plásmidos resultantes se purificaron y se evaluaron los tamaños de los insertos, seleccionando 11 para ser secuenciados. Se dedujo la secuencia aminoacídica de los prepro-péptidos identificados. Mediante el análisis in-sílico se seleccionaron 8 péptidos maduros, los cuales fueron sintetizados por química F-moc y purificados por RP-HPLC. Se evaluó la actividad antimicrobiana contra cepas Escherichia coli y Staphyloccocus aureus ATCC y actualmente se está analizando la capacidad de permeabilizar membranas de extracto lipídico total de E. coli y de lisarlas mediante la fluorescencia de carboxifluoresceína (CF) atrapada en el interior de liposomas unilamelares grandes (LUVs), dispersión dinámica de luz (DLS) y nefelometría.De los 8 péptidos estudiados, dos inhibieron el crecimiento de E. coli (CIM=600-500 µg/mL) y uno inhibió tanto el crecimiento de E.coli (CIM=250-125 µg/ml) como el de S. aureus (CIM=500-250 µg/mL). Este último produjo un aumento de la señal de fluorescencia de CF con un máximo entre los 250-300µg/ml, y el análisis de la dispersión mostró un gran aumento de la intensidad más allá de los 250 µg/mL. Un péptido control sin actividad antimicrobiana no mostró señal de fluorescencia de CF ni aumento en la intensidad de luz dispersada, es decir que las determinaciones en sistemas modelo parecen corresponderse con la actividad antimicrobiana del péptido.A partir de los análisis del comportamiento de éstos péptidos frente a sistemas modelos y del análisis de sus secuencias nos proponemos caracterizar el mecanismo de acción de los mismos a fin de evaluar posibles modificaciones químicas que mejoren su performance.