Estudio Comparativo de Perfiles Séricos Proteicos Obtenidos por Electroforesis Capilar de Zonas (CZE) y Electroforesis en Acetato de Celulosa

A. V. LAPIERRE, L. L. SOMBRA, M. F. SILVA, R. A. OLSINA, L. D. MARTÍNEZ

Merlo, San Luis

Congreso; III Congreso Argentino de Química Analítica; 2005

Asociación Argentina de Químicos Analíticos

Introducción: La Electroforesis Capilar (CE) es una técnica que esta siendo aplicada en los laboratorios de análisis clínicos, debido a sus resultados exactos, precisos y reproducibles con tiempos de análisis en el orden de minutos. La cuantificación de los perfiles electroforéticos en pacientes con enfermedades como mieloma múltiple, esclerosis, artritis reumatoidea y patologías hepáticas deben ser precisos y reproducibles en un mínimo de tiempo. Gran parte de los métodos electroforéticos tradicionales (por ej. electroforesis en acetato de celulosa) se aplican al diagnóstico clínico y se relacionan con el estudio de anomalías proteicas en diferentes fluidos biológicos. Objetivos: Realizar un estudio comparativo de dos metodologías analíticas para la determinación de proteínas séricas: CZE y electroforesis en acetato de celulosa (ACE). Materiales y Métodos: Las experiencias se llevaron a cabo con un Sistema Modular Beckman P/ACE MDQ acoplado con una PC-IBM y Software P/ACE System MDQ. Las muestras fueron inyectadas en forma hidrodinámica con una presión de 0,5 psi durante 5 segundos. Los capilares obtenidos de MicroSolv Technology Corporation tienen las siguientes dimensiones: 57 cm de longitud total, 50 cm de longitud efectiva, 75 µm ID, 375 µm OD. Resultados: Se obtuvo una buena correlación en términos de cuantificación y reproducibilidad entre los resultados de las dos técnicas analizadas. Los mejores resultados por CZE se obtuvieron bajo las siguientes condiciones experimentales: buffer de corrida tetraborato de sodio 25 mM, pH 9,6; voltaje aplicado 25 kV, temperatura del capilar 25 °C; inyección hidrodinámica a 0,5 Psi durante 5 segundos. La detección se realizó a 200 nm, trabajando con sueros diluidos 1:50. Se logró la separación y cuantificación por CZE de las fracciones proteicas con buena resolución, reproducibilidad y exactitud en menos de 15 min. Conclusiones: La metodología por CZE resulta muy atractiva por varias razones, entre ellas podemos mencionar su elevado grado de automatización, el escaso consumo de reactivos, el requerimiento de pequeñas cantidades de muestra, el bajo costo de las columnas capilares sumado a su elevada sensibilidad y especificidad para la detección y cuantificación en comparación con electroforesis en acetato de celulosa. Bajos niveles de proteínas monoclonales que no pudieron ser resueltos por otras metodologías, fueron detectados por CZE. En este sentido podemos concluir que la metodología desarrollada es apropiada para la determinación de proteínas séricas difíciles de separar por ACE. Los resultados demuestran que es una excelente herramienta en el diagnóstico y monitoreo de ciertas enfermedades y discrasias pudiendo ser utilizada en análisis de rutina.