Efectos de nucleotidos extracelulares y sus productos de hidrolisis sobre la regulacion de volumen celular en hepatocitos de trucha (Oncorhynchus mykiss)

PAFUNDO, D.; SCHWARZBAUM, P.J.

Mar del Plata

Simposio; Joint Congress of Biochemical Societies; 2004

Sociedad Argentina de Fisiologia

En hepatocitos de trucha, el aumento de volumen inducido por medios hipotonicos es seguido de una disminución compensatoria conocida como RVD (volume regulatory decrease). Se ha postulado que el ATP extracelular y otros nucleotidos podrian interactuar con receptores P (purínicos y pirimidinicos) de tipo 2 (P2) para modular esta respuesta regulatoria de volumen. Por otro lado, dado que ectoenzimas ubicadas en la superficie de la membrana celular podrian desfosforilar totalmente el ATP, la adenosina resultante podria unirse a receptores P de tipo 1 (P1) y modular el RVD por mecanismos aun desconocidos. En el presente trabajo se caracterizó en hepatocitos de trucha el efecto del ATP y sus productos de hidrolisis, y del UTP sobre el RVD. El volumen celular fue estimado por microscopia de fluorescencia utilizando BCECF. El RVD fue evaluado a partir de su velocidad inicial (vRVD) y a los 40 min de iniciada la regulación de volumen (RVD40). Resultados: en presencia de medio hipotonico (60% de isotonico), los hepatocitos aumentaron su volumen 1.6 veces, seguido de un vRVD de 1.7 min-1 y RVD40 60.2%. En presencia de 5 µM de ATP, UTP, UDP o ATPgS (agonistas P2) el vRVD se incrementó 1.5-2 veces, mientras que no se detectaron cambios en el valor de RVD40. El agregado de 100 µM de suramina o cibacron blue (antagonistas P2) al medio hipotonico no produjo efecto en el vRVD pero redujo el RVD40 53-58%. La incubación de hepatocitos en presencia de 5 µM de [g32P]ATP o [a32P]ATP causó la liberación extracelular de [g32P]Pi (0.21 nmol 10-6 cels min-1) y de [a32P]Pi (aprox. 8 10-3 nmol 10-6 cels min-1), sugiriendo la presencia de ectoenzimas capaces de hidrolizar totalmente el ATP. Con respecto al efecto de la activacion de P1 sobre el RVD, 5 µM adenosina en presencia y en ausencia de 100 µM NBTI (un bloqueante de la captación de adenosina) provocaron una disminución del RVD40 de 37-44% mientras que la 8-fenilteofilina, un antagonista P1, aumentaron el RVD40 en15%. En conclusión, los resultados arriba descriptos indican que el ATP, UTP y UDP, actuando via P2, son importantes factor que promueven el RVD de hepatocitos de trucha, mientras que la actuaría via P1 inhibiendo la respuesta regulatoria de volumen. Con subsidios de F. Antorchas, UBA, CONICET, ANPCYT (11017).