Regulación dinámica de ATP extracelular en E. coli

ALVAREZ, CORA LILIA1; CORRADI, GERARDO1, 2; LAURI, NATALIA1; MARGINEDAS FREIXA, IRENE8, 9; LEAL DENIS, MARÍA FLORENCIA1, 3; ENRIQUE, NICOLÁS6, 7; MATE, SABINA MARÍA4, 5; MILESI, VERÓNICA6, 7; OSTUNI, MARIANO ANIBAL8, 9; HERLAX, VANESA Y SCHWARZBAUM PABLO

Congreso; Reunión Anual Safis. 5-7/10/16; 2016

Estudiamos la regulación dinámica de ATP extracelular (ATPe) en Escherichia coli, que depende de la liberación deATP y de la hidrólisis de ATPe (actividad ATPasa). Utilizamos distintos contextos: E. coli aisladas, vesículas demembrana externa (OMVs) purificadas de E. coli, E. coli co-incubadas con células intestinales Caco-2 y E. coli enperfusiones de segmentos intestinales de rata (SI). La [ATPe] fue monitoreada de manera contínua porluminometría. La actividad ATPasa fue estimada por luminometría y por un método radioactivo. En E. coli y OMVs,la liberación de ATP fue inducida por exposición a los péptidos melitina (MEL) y mastoparan 7 (MST7), mientrasque en Caco-2 y SI, la liberación de ATP fue inducida por agregado de E. coli. En E. coli y OMVs, la actividad ATPasaaumentó linealmente con [ATPe] (0.1-1 μM). Además, la actividad ATPasa de E. coli aumentó 3.6 veces en mediossin fosfato, y se redujo 60% en presencia de AMP-CPP, un análogo no hidrolizable de ATP. En OMVs y en E. coli, la[ATPe] se mantuvo estable en ausencia de estimulo y aumentó de manera aguda 3 y 7 veces con el agregado deMST7 y MEL, respectivamente. En células Caco-2, el agregado de E. coli indujo un aumento de [ATPe] hasta unmáximo, seguido de una rápida disminución, lo que sugiere una alta actividad hidrolítica de ATPe. La incubacióncon carbenoxolona (inhibidor de la salida de ATP) disminuyó 80% la [ATPe] inducida por E. coli. En SI, la perfusiónde E. coli provocó un aumento del doble en la [ATP] del lumen, respecto a sus niveles basales. En resumen, laregulación de ATPe en E. coli depende del balance dinámico entre la actividad ATPasa y la liberación de ATP almedio extracelular. Ese balance podría ser alterado por las OMVs, ya que éstas poseen su propia capacidad deregular ATPe. Además, E. coli es capaz de inducir liberación de ATP tanto en las células Caco-2 como en SI. Losresultados sugieren un importante papel de E. coli en la regulación de ATPe del lumen intestinal in vivo.Con subsidios UBACYT (20020130100027BA), PICT 2014-0327, CONICET (PIP 20110100639 Y11220150100459) y ECOS Sud (Francia)-MINCYT(Argentina) A15S01, PDTS-CIN 193.