Homeostasis del ATP extracelular en eritrocitos humanos

LEAL DENIS F, MONTALBETTI N, ESPELT MV, SCHWARZBAUM PJ

Mar del Plata

Congreso; Reunion anual de la Sociedad Argentina de Fisiologia; 2011

SAFIS

Varios estímulos fisiológicos promueven la liberación de ATP al medio extracelular. En eritrocitos humanos el AMPc induce la salida de ATP al participar en una vía de señalización que involucra a las proteínas Gi y Gs y a adenilato ciclasas (AC). El ATP extracelular (ATPe) resultante y sus productos de hidrólisis pueden activar receptores P (purinérgicos), mientras que su concentración es regulada por actividad ecto-ATPasa de ENTPDasas. El objetivo de este trabajo es estudiar la homeostasis del ATPe de eritrocitos humanos. Para ello se procederá a analizar la cinética de acumulación de ATPe teniendo en cuenta las vías de liberación de ATP mediadas por proteína Gi, la activación de receptores P y la actividad ecto- ATPasa. La concentración de ATPe ([ATP]e) fue medida por luminometría utilizando la reacción de la luciferina-luciferasa. La liberación de ATP fue inducida por mastoparán-7 (Mas-7), activador de Gi, y cuantificada mediante el monitoreo de la cinética de acumulación de ATPe. La actividad ecto-ATPasa de eritrocitos fue estimada midiendo la producción de 32Pi a partir de 1μM [g-32P]ATP. En presencia de 10 μM Mas-7 la [ATP]e mostró un fuerte aumento en el tiempo, alcanzándose un valor 9 veces mayor que el basal a los 20 min. El pretratamiento con toxina pertussis (bloqueante de Gi), 2-metil-tio-ADP (inhibidor de AC) o carbenoxolona (inhibidor de la salida de ATP por panexina 1) produjo una reducción en la salida de ATP de 67%, 65% y 57%, respectivamente. En síntesis, la salida de ATP activada por Mas-7 es bloqueada parcialmente por la toxina pertussis, indicando un mecanismo dependiente de la activación de Gi asociado a aumentos en el AMPc. El 2-metil-tio-ADP, un agonista del receptor P2Y13 que inhibe la adenilato ciclasa, generó una disminución en [ATP]e. Además, la disminución en [ATP]e por carbenoxolona indicaría una salida de ATP mediada por panexina 1. Con subsidios de UBACYT (20020100100090), CONICET (PIP1187) y ANPCyT (0151).