Inhibición de la formación de biopelículas en Escherichia coli O157:H7 mediante el pequeño ARN regulador McaS.

GONZALES MACHUCA, ADRIAN; SARNACKI SEBASTIÁN H.; QUIROGA CECILIA

Simposio; VTEC Argentina 2022. Primer Simposio Argentino sobre Escherichia coli productor de toxina Shiga (STEC/VTEC) responsable del Síndrome Urémico Hemolítico.; 2022

Asociación Argentina de Microbiología (AAM). EEA-AMBA (INTA) y Facultad de Medicina, UBA. Buenos Aires, República Argentina.

Escherichia coli enterohemorrágica (EHEC) O157:H7 es el principal agente responsable de colitis hemorrágica y síndrome urémico hemolítico. Este último es la causa principal de insuficiencia renal aguda y trasplante renal en niños de la Argentina. EHEC posee diversas adhesinas que intervienen en el proceso de colonización, entre ellas curli, la cual participa en la formación de biopelículas y otros procesos como adherencia celular, invasión y activación del sistema inmune. Curli se encuentra codificada en los operones csgBAC y csgDEFG, siendo csgD su principal regulador. Distintos pequeños ARNs reguladores (srRNA) participan en la regulación post-transcripcional de curli, por ej., McaS, un srRNA Hfq-dependiente que disminuye la expresión de csgD que lleva a la inhibición de la producción de curli y la formación de biopelículas. En este trabajo, nos propusimos generar un sistema de expresión de McaS capaz de inhibir la síntesis de curli para establecer las bases de un posible mecanismo terapéutico contra EHEC O157:H7. Para ello, se seleccionaron 6 aislamientos de EHEC O157:H7 (CQ17, CQ144, CQ145, CQ146, CQ147 y CQ148), a los que se les evaluó la expresión del gen de la toxina Shiga stx2 por RT-PCR. Luego, se determinó su capacidad de síntesis de curli mediante el análisis de las macrocolonias usando rojo congo (0,04 mg/mL) y Coomassie brillant blue G (0,02 mg/mL) y se cuantificó la adherencia al poliestireno usando cristal violeta (0,01%) a distintas temperaturas (28°C y 37°C) y tiempos de incubación (48 y 120 h). Se identificó a CQ146 como el único aislamiento de EHEC productor de altos niveles de curli a 28°C tanto a nivel de morfotipo como a nivel de adherencia. No se observó producción de curli a 37°C en ninguno de los aislamientos de EHEC. El análisis de la secuencia de stx2 de CQ146 reveló que pertenece al subtipo Stx2c, asociado a cuadros clínicos de gravedad. Con el fin de revertir la producción de curli se introdujo el clon pMcaS (CmR), que contiene la secuencia de McaS, en las cepas EHEC CQ146 y CQ17, y en otras bacterias productoras de curli, como ser E. coli uropatógena (CQ7), Salmonella enterica sv. Enteritidis (ArJEG) de procedencia clínica y en la cepa de referencia E. coli MG1655. Luego de 48h a 28°C, se observó una reducción en la síntesis de curli en MG1655, CQ146, CQ7 y ArJEG por adherencia; y no se observó ninguna reversión del fenotipo a 37°C. La adherencia al poliestireno en cepas portadoras de pMcaS se redujo significativamente a 28°C (p