Análisis filogenético de genes putativos de Fosfolipasas A de Leishmania spp. como posible marcador molecular

LÓPEZ, SEBASTIÁN; GIMENEZ, GUADALUPE; MARCO, JORGE DIEGO; RUYBAL, PAULA; BELAUNZARÁN, MARÍA LAURA; LAUTHIER JUAN JOSÉ

CABA

Simposio; XXI Simposio Internacional Mundo Sano; 2023

Fundación Mundo Sano

Las leishmaniasis son parasitosis causadas por diversas especies del género Leishmania y que junto con los mecanismos inmunes del hospedero resultan en un amplio espectro de manifestaciones clínicas, histopatológicas e inmunopatológicas. En Argentina coexisten L. (Viannia) braziliensis, L. (Leishmania) amazonensis y L. (Viannia) guyanensis, especies responsables de leishmaniasis tegumentaria americana y en el caso de L. (Leishmania) infantum causante de leishmaniasis visceral. Las Fosfolipasas A1 (PLA1) son enzimas que hidrolizan fosfolípidos en la posición sn-1 y si bien se han detectado en muchos organismos, sólo un número limitado de secuencias nucleotídicas están disponibles para su comparación y clasificación. En relación a tripanosomátidos, varios genomas han sido completamente secuenciados, pero son pocas las secuencias de PLA1 identificadas: Trypanosoma brucei, T. cruzi y L. (V.) braziliensis (GenBank ACCN: AJ716154.1, JN975637, KJ957826). En el presente trabajo amplificamos, secuenciamos y analizamos por herramientas bioinformáticas los genes putativos de PLA1 de Leishmania spp. a partir del gen PLA1 de L. (V.) braziliensis (LbPLA1), previamente identificado y caracterizado mediante clonado y expresión por nuestro grupo (Bott y col. 2020). Se amplificaron por PCR los genes putativos de las PLA1 de L. (L.) amazonensis (LaPLA1), L. (L.) infantum (LiPLA1) y LbPLA1 a partir de ADN de promastigotes de cultivo axénico de dichas especies y de ADN de aislados de muestras clínicas. Los productos amplificados se separaron por electroforesis en geles de agarosa 2% y se secuenciaron (Macrogen Inc., Corea). Se generaron las secuencias nucleotídicas consenso para cada especie, utilizando el software STADEN Package y posteriormente se alinearon, curaron y se realizó el análisis filogenético mediante el software MEGA 11. A partir de estas secuencias se construyeron árboles filogenéticos para el gen de la PLA1 en conjunto con secuencias disponibles en las bases de datos (NCBI ó TriTrypDB) mediante el método de Neighbour Joining (NJ) utilizando el software MLSTest. El análisis bioinformático de todas las secuencias nucleotídicas permitió diferenciar subgéneros, complejos de especie y especies, en congruencia con la taxonomía del género. Los aislados provenientes de muestras clínicas (casos autóctonos), se agruparon según los diferentes grupos taxonómicos del género y fueron congruentes con la taxonomía determinada por el marcador HSP70. PLA 1 es un prometedor marcador molecular en la diferenciación taxonómica de Leishmania spp. y podría aportar un mayor poder discriminatorio de variantes intraespecie con respecto al marcador de referencia HSP70.