Diagnóstico molecular de Strongyloides stercoralis mediante PCR en tiempo real, comparación con métodos de diagnóstico convencionales

ARGÜELLO LISANA BELÉN; ALBA SOTO CATALINA; RUYBAL PAULA; GONZALEZ CAPPA STELLA MARIS; REPETTO SILVIA ANALÍA

CABA

Otro; XXVII Reunión Anual de la Sociedad Argentina de Protozoología; 2015

Sociedad Argentina de Protozoología

El diagnóstico habitual de S. stercoralis (S.s) se realiza por observación microscópica (OM) de larvas en materia fecal (mf) y cultivo en agar nutritivo (CAN). En las infecciones crónicas, un único examen presenta una sensibilidad de 30% por la fluctuante excreción de larvas.Para mejorar el diagnóstico desarrollamos inicialmente una PCR convencional (cPCR) y luego una PCR en tiempo real (qPCR) para la detección del parásito en muestras de materia fecal. Su sensibilidad analítica (S) es 0,02 y 0,01 larvas/g materia fecal, respectivamente. En este trabajo comparamos la eficiencia de ambas técnicas moleculares con los métodos convencionales para el diagnóstico de S.s Se realizó un estudio descriptivo, transversal y de validación de pruebas diagnósticas. Se utilizaron 98 muestras de mf de pacientes > 18 años con antecedentes de área endémica para S.s, sin riesgo de infección exógena. Con una muestra de materia fecal fresca se realizó OM, CAN, cPCR y qPCR. La extracción de ADN se realizó combinando lisis mecánica con el QIAamp DNA Stool Mini Kit. Se amplificó la región rARN 18s de S.s mediante cPCR y qPCR. Esta última fue estandarizada mediante diluciones seriadas en factor 2 a partir de 50 larvas/g de materia fecal. Se consideró como test de referencia OM y CAN. El CAN fue positivo en 28/98 muestras y la OM en 20/98. Se detectó S.s en 67/98 muestras por cPCR. Por qPCR se detectaron 73/98 muestras y el rango Ct fue de 28.23-36,24 (mediana 32,54). Sólo una muestra fue negativa por qPCR pero positiva por CAN y cPCR. La S de la qPCR fue 94% y VPN 96% cuando se comparó con OM; S y VPN de 96% frente a CAN. La S y el VPN de la cPCR fueron del 100% frente a OM y al CAN. La PCR en tiempo real es una herramienta diagnóstica para S.s con alta S y VPN con eficiencia similar a la cPCR. Se ha incrementado el numero de pacientes positivos gracias a esta técnica.