Determinación de las poblaciones celulares estimuladas en la inmunización con la vacuna génica para Herpes Virus Bovino-1 (BHV-1) y el adyuvante RN-205 por citometria de flujo

RUYBAL PAULA; GRAVISACO MARÍA JOSÉ; ZAMORANO PATRICIA; TABOGA OSCAR; WALDNER CLAUDIA; MONGINI CLAUDIA

Buenos Aires, Argentina

Jornada; V Jornadas Científicas del Grupo Rioplatense de Citometria de Flujo; 2002

Grupo Rioplatense de Citometria de Flujo

El objetivo del trabajo fue estudiar la inducción de poblaciones celulares inmunológicamente competentes en ratones inmunizados con la vacuna génica BHV-1 (DNA MIX) en asociación o no con el adyuvante Ribozim RN-205 (RN-205). Como la vacunación efectiva para prevenir la enfermedad (rinotraqueitis infecciosa bovina) requiere de la inducción de una buena respuesta inmune celular y humoral, se investigó la expresión de CD11b (Mac-1, monocito/macrófagos), CD4 (linfocitos T colaboradores), CD8 (linfocitos T citotóxicos) y CD45R (B220, linfocitos B) en esplenocitos de ratones inmunizados con la asociación de la vacuna génica BHV-1 mediante análisis citométrico de flujo. Las células esplénicas (1x106) se incubaron a 4°C durante 30 minutos con los siguientes anticuerpos monoclonales: FITC anti-CD4, PE anti-CD8, FITC anti-CD11b y PE anti CD45R o con los anticuerpos monoclonales como control del isotipo correspondientes. Las células se evaluaron en un citómetro de flujo (FACS Calibre, Becton-Dickinson, San José, California). Los resultados obtenidos se expresan en la siguiente tabla:     Linfocitos CD4+ (1x107) Linfocitos CD8+ (1x107) Linfocitos B CD45R (1x107) Macrofagos CD11b (1x107) DNA MIX 1,76 ± 0,47 0,93 ± 0,22 3,41 ± 0,66 0,12 ± 0,04 DNA MIX-RN205 3,84 ± 1,50 1,50 ± 0,47 8,20 ± 1,80 1,26 ± 0,32 RN-205 0,81 ± 0,13 0,37 ± 0,20 4,44 ± 0,51 0,46 ± 0,09 normal 1,25 ± 0,19 0,65 ± 0,12 2,55 ± 0,30 0,10 ± 0,01   En los bazos de los ratones inoculados con el adyuvante o con la vacuna génica y el adyuvante, se observó un aumento significativo en el número de células en la región correspondiente a los monocitos/macrófagos definida en un gráfico de FSC vs SSC. Este datos se correlacionó con el aumento de la expresión de CD11b en los esplenocitos de dichos ratones. Nuestros resultados indican que al combinar la vacuna génica BHV-1 (DNA MIX) con el adyuvante RN-205 se induce una aumento en todas las poblaciones celulares estudiadas.