BIOSEPARACIÓN DE TRIPSINA A PARTIR DE PÁNCREAS PORCINO POR PRECIPITACIÓN DE COMPLEJOS TRIPSINA-POLIACRILATO.

PORFIRI, MA. CECIIA; BRAIA, MAURICIO; PICÓ, GUILLERMO; FARRUGGIA, BEATRIZ; ROMANINI, DIANA

Rosario

Congreso; X Congreso. XXVIII Reunión Anual de la Sociedad de Biología de Rosario.; 2008

Sociedad de Biología de Rosario

El alto contenido proteico de ciertos desechos de la industria frigorífica como el páncreas porcino o bovino, puede ser aprovechado aplicando técnicas bioseparativas. Algunas de estas técnicas se basan en la formación de complejos entre polímeros de cadena flexible con carga eléctrica (polielectrolitos) y proteínas. Una de las proteínas de alto valor comercial contenidas en estos desechos es la tripsina, una proteasa de alto valor comercial la cual es utilizada en una amplia variedad de procesos industriales. En estudios previos hemos demostrado que, modificando las variables del medio (pH, temperatura, fuerza iónica, relación molar proteína/polímero, etc.), el complejo soluble formado por tripsina y poliacrilato (PAA) puede tornarse insoluble y separarse del medio por simple decantanción. El objetivo de este trabajo fue aislar la tripsina aplicando un diseño previamente desarrollado por nosotros a la fuente natural de ésta proteína. Para ello se adicionaron 100mL de PAA 0,20% p/p, pH 3,00 a 1mL de un homogenado de páncreas porcino el cual fue preparado en bufferTris-HCl 50mM, pH 8,00. La mezcla se incubó por 10 minutos a temperatura ambiente y luego se centrifugó a 3000 rpm. El precipitado fue redisuelto por dos procedimientos diferentes. El primero consistió en adicionar una solución buffer fosfato, pH 7,00 hasta alcanzar el volumen inicial y el segundo con Tris-HCl a pH 8,00. Se procedió luego a determinar la actividad enzimática utilizando la capacidad de esta enzima de hidrolizar el sustrato BAPNA (a-N-benzoil-L-Arginine-p-nitroaniline) y a la determinación de la concentración de las proteínas totales y ácidos nucleicos por el método de Warburg a todas las fracciones. Los factores de purificación determinados en cada caso arrojaron valores de 5,94 y 8,70 y los rendimientos fueron de 88,75 y 84,62% respectivamente para cada procedimiento. Los resultados obtenidos aplicando el diseño de precipitación por formación de complejos insolubles tripsina-PAA mostraron ser altamente eficientes en cuanto a la purificación y con alto rendimiento de la proteína de interés cuando se lo aplicó a la fuente natural, el homogenado de páncreas porcino.