Mecanismos moleculares involucrados en la regulación funcional de las células germinales masculinas por Lactato

GALARDO MARÍA N; RIERA MARÍA F; REGUEIRA MARIANA; PELLIZZARI ELIANA H; CIGORRAGA SELVA B; MERONI SILVINA B

Mar del Plata

Congreso; LVI Reunion Anual de la Sociedad Argentina de Investigacion Clinica; 2011

Sociedad Argentina de Investigacion Clinica

La espermatogénesis ocurre en un microambiente particular constituido por productos de secreción de las células de Sertoli. Dentro de los mencionados productos se destaca el lactato (L), principal sustrato energético de las células germinales (CG). Hemos observado que L incrementa la producción de especies reactivas del oxígeno (ROS) las que conducen a la activación de señales de transducción tales como PKB y p38-MAPK en CG. Actualmente las ROS son consideradas moléculas señal cuya fuente de producción varía según el estímulo y el tipo celular en estudio. Hasta el momento se desconoce que mecanismos utiliza L para incrementar la producción de ROS en CG. Asimismo no se analizaron los mecanismos moleculares utilizados por las ROS para activar las señales de transducción mencionadas. El objetivo de este trabajo fue analizar los mecanismos utilizados por L para incrementar la producción de ROS y los mecanismos moleculares utilizados por dichas ROS para activar PKB y p38-MAPK. Se utilizaron CG (espermatocitos y espermátides) aisladas de testículos de rata de 31 días de edad. Las mismas fueron cultivadas por diferentes períodos de tiempo en ausencia o presencia de L 20mM y de los siguientes compuestos: rotenona (R) 1uM –inhibidor del Complejo I NADH deshidrogenasa-, alopurinol (Al) 100uM –inhibidor de xantino oxidasa-, apocinina (Ap) 100uM –inhibidor de las NAD(P)H oxidasas-, oxamato (O) 20mM –inhibidor de LDH-, wortmanina (W) 0.1uM –inhibidor de PI3K- y PP2 20uM –inhibidor de Src-. Se analizó por el ensayo de TBAR la presencia de malondialdehído (MDA) y por western blot se determinaron los niveles de PKB- y p38-MAPK- fosforiladas (P). Se obtuvieron los siguientes resultados: 1) TBAR: B: 0.85±0.09, L30’: 1.26±0.08*, L+R: 1.31±0.10*, L+Al: 1.20±0.09*, L+Ap: 0.93±0.08, L+O: 0.82±0.09pmoles MDA/ug proteína, X±DS, n=3, *P