Factores de virulencia de levaduras aisladas de ambientes olivícolas

NALLY M.C,; TORO M.E.,; CASTELLANOS DE FIGUEROA, LUCÍA INÉS; VAZQUEZ F.

Buenos Aires

Congreso; XII Congreso Argentino de Microbiología; 2010

Asociación Argentina de Microbiología

Introducción: Las levaduras son principalmente saprófitas y se encuentran ampliamente distribuidas en diversos ambientes. Existe un creciente interés para utilizar levaduras como agentes de biocontrol de hongos fitopatógenos. Si bien las levaduras son consideradas microorganismos no-patógenos para el ser humano, su empleo como biocontroladoras hace necesario la evaluación de su potencial patogenicidad. Los géneros <i>Candida</i> y <i>Cryptococcus</i> son citados ampliamente como patógenos oportunistas, principalmente en pacientes inmunodeprimidos. La habilidad infectiva de las levaduras depende de varios factores como el crecimiento a altas temperaturas, la formación de pseudohifas, y la producción de enzimas hidrolíticas (proteasas y fosfolipasas). Varios factores de virulencia convergentes hacen que la levadura se considere más infectiva. <b>Objetivo</b>: Determinar la presencia de factores de virulencia en las levaduras aisladas e identificadas de ambientes olivícolas. <b>Materiales y Métodos</b>: Se tomaron muestras al azar de olivos (hojas, frutos, ramas), de suelo olivícola y alperujo. El aislamiento de levaduras se realizó en medio YEPD (extracto de levadura-peptona-dextrosa) a 25°C. Los aislamientos se identificaron por características fisiológicas y bioquímicas. En todos los ensayos se sembraron puntualmente 10µl de los distintos aislamientos. Para el ensayo de crecimiento a 37°C, las levaduras se sembraron en medio YEPD y se incubaron por 72h a 37°C. Luego se registró crecimiento (+) ó (-). Para la formación de pseudohifas se sembró cada aislamiento en medio para determinar morfología y se incubaron durante 4 días a 25°C. Posteriormente se observó la presencia o ausencia de pseudohifas. Actividad proteolítica y fosfolipídica: para detectar la actividad proteolítica se utilizó el medio con albúmina bovina como sustrato. Las placas se incubaron durante 4 días a 37°C. En el caso de actividad fosfolipídica se empleó el medio yema de huevo y las placas se incubaron 7 días a 37°C. Para las actividades enzimáticas se observó la presencia de halos de degradación alrededor de las colonias de levaduras y se determinó el valor Pz (radio de la colonia/radio de la colonia + halo). Los ensayos se realizaron por triplicado. <b>Resultados</b>: Se aisló 12 levaduras pertenecientes a los géneros <i>Aureobasidium</i>, <i>Candida</i>, <i>Cryptococcus</i> y <i>Rhodotorula</i>. Todos los aislamientos presentaron al menos un factor de virulencia. Los aislamientos <i>Aureobasidium pullulans</i>BAp7 y <i>Cryptoccocus albidus</i> BCa19 presentaron tres factores de virulencia. BAp7 mostró actividad proteolítica (Pz=0.73), fosfolipídica (Pz = 0.436) y formación de pseudohifas. BCa19 presentó actividad fosfolipídica (Pz=0.791), formación de pseudohifas y crecimiento a 37°C. <b>Conclusión</b>: Los resultados de este trabajo muestran que levaduras de los géneros <i>Aureobasidium</i> y <i>Cryptoccocus</i> aisladas de ambientes olivícolas presentan una potencial patogenicidad, factor a tener en cuenta para su empleo como agente de biocontrol.