Determinación de las condiciones óptimas de expresiòn de B-glucosidasa de Shewanella sp. G5 por qPCR.

HÉCTOR A. CRISTÓBAL; RAMIRO POMA; VERÓNICA RAJAL; CARLOS M. ABATE

Montevideo - Uruguay

Congreso; ALAM - XX Congreso Latinoamericano de Microbiología; 2010

Sociedad Uruguaya de Microbiología

Las glicosil hidrolasas presentan una gran plasticidad de sustratos, dentro de este grupo se describen las β-glucosidasas (EC.3.2.1.21). Estas últimas son un grupo heterogéneo de enzimas y su estudio actualmente presenta interés biotecnológico, por ejemplo en la industria vitivinícola y la citrícola. Shewanella sp. G5 fue aislada del intestino de Munida subrrugosa a partir del Canal de Beagle (Argentina), y seleccionada como productora de dos β-glucosidasas frío activas, las cuales son codificadas por los genes bgl-A y bgl. Ambas enzimas fueron clasificadas dentro de las familias 1 y 3 de las glicosil hidrolasas, respectivamente. El objetivo del presente estudio optimizar las condiciones de crecimiento por qPCR de Shewanella sp. G5, para obtener incrementos en los niveles de expresión de las enzimas en estudio. Shewanella sp. G5 se cultivó en diferentes condiciones: medio de cultivos (LBn y MMB), temperaturas (10 y 30 ºC), y fuentes de carbono (celobiosa y glucosa). Los genes bgl-A, bgl y gyrB fueron cuantificados y normalizados mediante el método 2-ΔΔCt. La actividad enzimática fue cuantificada mediante el sustrato p-nitro-fenil-β-glucopiranosido a partir de los extractos obtenidos de las diferentes condiciones de crecimiento. Los valores de 2-ΔΔCt determinados para la expresión relativa de ambos genes (bgl-A y bgl) fueron 13, 14, 27 y 15, 19, 30, respectivamente en medio MMB incubado a 30 ºC, utilizando celobiosa como fuente de carbono. Asimismo, la actividad de expresión de las β-glucosidasas eb estudio presentó un incremento de 63% cuando se utilizó el medio MMB con celobiosa a 30 ºC. La determinación de las condiciones de crecimiento permitió establecer los niveles óptimos de expresión de los genes bgl-A y bgl.