Maduración de células dendríticas y Trypanosoma cruzi en un modelo de co-cultivo in vitro

PONCINI C.; ALBA SOTO C; SOLANA ME; GONZÁLEZ CAPPA SM

Mendoza

Congreso; VII Congreso de Protozoología y Enfermedades Parasitarias; 2005

Previos se demostramos que la infección de ratones C3H/HeN por la cepa RA de T. cruzi inhibe la maduración de células dendríticas (CD) esplénicas. Nuestro objetivo fue contar con un modelo in vitro de co-cultivo de T. cruzi con CD derivadas de médula ósea para determinar probables factores parasitarios responsables de inducir las alteraciones observadas en su maduración in vivo. Se prepararon cultivos enriquecidos en CD a partir de médula ósea murina, los que se sometieron a distintos estímulos (LPS, tripomastigotes circulantes –trip, y lisados de epimastigotes de cultivo –epi, ambos de cepa RA de T. cruzi). Los cultivos enriquecidos en CD presentaron al microscopio de epi-iluminación células no adherentes con proyecciones tipo dendritas. El análisis fenotípico por citometría de flujo, reveló que un 40 %  de las células eran CD11c+.  De ellas 75% co-expresan MHCII, marcador asociado a madurez, y moléculas coestimulatorias CD80 (75%) y CD86 (95%). Además, el 98% de las CD expresaron CD11b, pero no CD8a (linaje mieloide). Evaluamos la respuesta de las CD11c+ con alta expresión de MHCII ante los distintos estímulos. El LPS (10mg/ml, 24hrs) incrementó entre un 60 y 100% el número de CD con las características mencionadas en comparación a los controles sin estímulo. El lisados de epi (10mg/ml, 24hrs) también produjo un incremento pero solo del 30%. El co-cultivo con trip (rel. CD:trip 1:4, 24 h) no indujo variaciones significativas en el número de células con alta expresión del marcador, pero inhibió en 55% el incremento inducido por LPS. Las CD generadas in vitro reproducen las características observadas ex vivo y responden al co-cultivo con trip RA alterando la expresión de MHCII inducida por LPS. Por lo tanto, el modelo podría ser útil para analizar factores parasitarios responsables de estas alteraciones.