Dendrímeros-sirna: nanonaves silenciadoras

ANA PAULA PEREZ; EDER LILIA ROMERO; MARIA JOSE MORILLA

Montevideo

Congreso; Congreso de la Federación Farmacéutica Sudamericana; 2008

Federación Farmacéutica Sudamericana

Introducción. La dificultad de RNAs pequeños de interferencia (siRNA) para acceder eficientemente a células blanco limita su uso como terapia silenciadora de genes in vivo. Objetivos. Usar nanosistemas de entrega de siRNA basados en dendrímeros PAMAM debido principalmente a su mínima polidispersidad y tamaño comprendido en el rango de los nanométros. Diseño. Se formaron complejos binarios a partir de la combinación de distintas generaciones de dendrímeros PAMAM (G4, G5, G6 y G7) y siRNA anti-proteína fluorescente verde (eGFP), en distintas relaciones de carga +/-, (1/1, 5/1, 10/1 y 20/1). La formación de los complejos se estudió por desplazamiento de Bromuro de Etidio (BrEt), retardo electroforético y se determinó su tamaño y potencial Zeta. Con el objeto de disminuir el tamaño de los complejos binarios se agregaron diferentes polímeros (ácido colomínico, dextran o quitosan) formando complejos ternarios. La citotoxicidad de los complejos se estudió en células de glioblastoma y en macrófagos, por MTT y LDH en función de la concentración de siRNA (50 y 100 nM) y de la relación +/-. Finalmente, se determinó la eficiencia de silenciamiento de los complejos binarios, terciarios y del reactivo comercial Lipofectamina 2000. Resultados. La formación de los complejos se evidenció por desplazamiento de BrEt y por retardo electroforético. El tamaño resultó en el rango nanométrico y el potencial Zeta positivo en todos los complejos. La citotoxicidad, en ambos tipos celulares, fue apreciable sólo en la mayor relación de carga +/- (20/1). La eficiencia de silenciamiento fue mayor en los complejos binarios y ésta fue similar a la de lipofectamina, alrededor de 50%. Conclusiones. Los complejos PAMAM-siRNA anti-eGFP con eficiencia de silenciamiento de alrededor de 50% con tamaño en el rango nanométrico y carga superficial positiva no resultaron citotóxicos in vitro en bajas concentraciones de dendrímeros; por lo que podría proponerlos como posibles candidatos para el delivery de siRNA.