INVESTIGADORES
QUIROGA Maria paula
congresos y reuniones científicas
Título:
La integrasa INTI1 es capaz de movilizar al cassette inusual blages-1, encontrado en integrones de clase 1
Autor/es:
QUIROGA MARÍA PAULA; GALÁN ANGÉLICA VIVIANA; FONSECA ÉRICA L; VICENTE ANA CAROLINA; CENTRÓN DANIELA
Lugar:
C,A,B,A,
Reunión:
Congreso; VII Congreso de la Sociedad Argentina de Bacteriología, Micología y Parasitología Clínicas; 2012
Institución organizadora:
Asociación Argentina de Microbiología
Resumen:
Objetivo:
Los integrones de clase 1 son elementos genéticos que contienen los componentes
de un sistema de recombinación sitio específico y generalmente están asociados
a multirresistencia antibiótica en aislamientos clínicos. Están compuestos por
el gen intI1 que codifica la recombinasa IntI1, el sitio de
recombinación attI1 y un promotor Pc que permite la expresión de los cassettes.
Los cassettes, a su vez, consisten de un marco de lectura abierto y un
sitio de recombinación attC, que es reconocido por la integrasa para
escindir del integrón al cassette e insertarlo en el sitio attI1
o en otro sitio attC. En un aislamiento de Pseudomonas aeruginosa
sensible sólo a colistin se encontró un integrón de clase 1 que contiene los cassettesorf126-blaGES-1-aac(6?)-IId. El cassette
inusual blaGES-1 codifica la enzima GES1 que confiere
resistencia extendida a β-lactámicos. Este cassette tiene la
particularidad que río abajo del gen blaGES-1 presenta una
secuencia de 13 nucleótidos con 100% de identidad con el sitio attI1 en
lugar de poseer un sitio attC típico.
El objetivo
de este estudio fue determinar si la integrasa de tipo 1 (IntI1) era capaz de
escindir al cassette inusual blaGES-1 e insertarlo en
un sitio attI1.
Material y
método: Realizamos ensayos de recombinación in vivo en la cepa E. coli
TOP10, siguiendo la metodología descripta por Gravel y col. 1998. Utilizamos
plásmidos recombinantes construidos para tal fin a partir del aislamiento
clínico de Pseudomonas aeruginosa PS1 y determinamos las frecuencias de
recombinación realizando PCRs con cebadores específicos.
Resultados:
Observamos que INTI1 provista en trans era capaz de escindir al cassette
inusual blaGES-1 e insertarlo en un sitio attI1 de
forma eficiente. Los sitios de escisión e inserción fueron verificados por
secuenciación de los amplicones correspondientes, evidenciando eventos de
recombinación sitio-específica.
Conclusiones:
A partir de los resultados de los ensayos de recombinación in vivo
demostramos la completa funcionalidad del cassette inusual blaGES-1
y confirmamos que un cassette inusual de este tipo puede ser utilizado
por IntI1 como sustrato para mediar su escisión e inserción en un sitio attI1
lo cual pone en evidencia la plasticidad del sistema de recombinación mediado
por la integrasa de tipo 1.