Los linfocitos T CD8+ heterotípicos anti-dengue son críticos en la patogénesis de la fiebre hemorrágica del dengue

TALARICO, LB; HIJANO, DR; BATALLE, JP; DIAZ, LM; ACOSTA, PL; BRUM-ORNELAS, C; MELENDI, GA; ACOSTA PL

Buenos Aires

Congreso; X Congreso Argentino de Virología; 2011

Sociedad Argentina de Virología

El virus dengue (DENV) es la causa más común de enfermedad arboviral en el mundo. Cerca de 100 millones de personas se infectan cada año y aproximadamente dos quintos de la población mundial se encuentran en riesgo de contraer una infección por DENV. A pesar de su importancia, no hay hasta el presente una vacuna aprobada para profilaxis o agentes antivirales para tratar la infección. Anualmente, 500.000 infecciones por DENV producen fiebre hemorrágica por dengue (FHD), con una tasa de mortalidad desde el 1% al 10%. Las hipótesis sobre el mecanismo de enfermedad de la FHD pueden dividirse en tres grupos que no son necesariamente excluyentes: 1) mecanismos de enfermedad asociados con anticuerpo heterotípico, 2) mecanismos explicados por reactividad cruzada de linfocitos T, y 3) un tercer grupo que no involucra anticuerpo ni reactividad cruzada de linfocitos T. Recientemente, en nuestro laboratorio establecimos un modelo de ratón inmunocompetente de FHD. Los ratones C57BL/6 adultos infectados secuencialmente con DENV-1 y DENV-2 desarrollaron trombocitopenia, permeabilidad vascular incrementada, hemorragias internas y transaminitis, signos característicos de la enfermedad en humanos. El objetivo de este trabajo fue determinar el papel de los linfocitos T CD8+ heterotípicos anti-DENV en la patogénesis de la FHD. La estrategia utilizada constó de una primo-infección de ratones C57BL/6 por vía intraperitoneal (IP) con DENV-1, DENV-2 o placebo y luego de 60 días se realizó una infección con DENV-2. En los ratones depletados de linfocitos T CD8+ y CD4+/CD8+ secuencialmente infectados con DENV-1-DENV-2 se encontraron niveles significativamente bajos de transaminasas, fosfatasa alcalina, creatininfosfoquinasa (CPK), lactato deshidrogenasa (LDH) y elevado recuento plaquetario en comparación con los ratones controles, mientras que en ratones depletados de linfocitos T CD4+, se encontraron niveles moderadamente bajos de las mismas enzimas. Asimismo, se encontraron niveles elevados de CPK y LDH y bajo recuento plaquetario en ratones que recibieron células T CD8+ de ratones infectados con DENV-1 y luego infectados con DENV-2. Con el fin de caracterizar los epitopes dominantes restrictivos H-2b en DENV-1 y DENV-2 para los linfocitos T CD8+ en ratones C57BL/6, se seleccionaron doce nonámeros candidatos empleando algoritmos predictivos y se evaluó la respuesta específica de epitope de célula T CD8+ mediante un ensayo de ELISPOT detectando la producción de interferón-gama. La respuesta restrictiva H-2b de linfocitos T CD8+ como resultado de la infección secuencial DENV-1-DENV-2 estuvo dominada por linfocitos T CD8+ dirigidos contra epitopes de la proteína NS4b. Los resultados de este trabajo muestran que los linfocitos T CD8+ juegan un papel crítico en la patogénesis de la FHD, mientras que los linfocitos T CD4+ serían menos críticos para el desarrollo de la enfermedad severa por dengue. La caracterización de los componentes de la respuesta inmune que intervienen en la FHD contribuirá al desarrollo de vacunas preventivas y agentes antivirales para el tratamiento de la enfermedad por DENV.