PRETRATAMIENTO DE MOCO CERVICAL PARA DETECCIÓN RÁPIDA DE Tritrichomonas foetus EN BOVINOS.

MORERO, MARIANA; OYHENART, JORGE

salta

Congreso; IX CONGRESO ARGENTINO DE PARASITOLOGÍA; 2022

Asociaciación Parasitológica Argentina

La amplificación isotérmica de ADN mediada por bucles (LAMP) se ha generalizado en el diagnóstico de unagran variedad de enfermedades. Nuestro grupo la ha empleado con éxito para el diagnóstico a campo deTritrichomonas foetus. Esta técnica puede ser llevada a cabo utilizando un incubador seco o baño de agua a 60-65°C, siendo capaz de detectar el protozoo en 2 ul de fluido prepucial o cervical. Sin embargo, el diagnósticodirecto a partir de muestras de moco cervico-vaginal (MCV) es difícil de llevar a cabo debido a su viscosidad.Esta propiedad del fluido cervical la otorgan las moléculas de mucina. El objetivo de este trabajo fue diseñarun pretratamiento que permita realizar la detección mediante LAMP de T. foetus en muestras de MCV bovinas.El pretratamiento consistió en diluir las muestras de MCV en agua y tratarlas con proteinasa K. Se realizarondiluciones seriadas en PBS desde 1000 hasta 0.001 trofozoítos/ul y las muestras de MCV fresco fueroncontaminadas artificialmente con T. foetus. Se evaluaron en reacciones de LAMP que permiten amplificarfragmentos de los genes factor de elongación alfa 1 o beta tubulina 2. La sensibilidad de ambas reacciones defue 0.1 trofozoítos/ul en muestras de MCV tratadas y diluidas en PBS. El pretratamiento diseñado nos permitiórealizar la detección directa del protozoo en muestras de MCV sin purificación previa de ADN.