Desarrollo de un procedimiento simple para la detección de Tritrichomonas foetus

MORERO, MARIANA; FUCHS, LUMILA; MESTRE, MARIA CECILIA; SERENO BRUNO, ESTEFANIA; PARADISO LANGHOFF, FRANCO; OYHENART, JORGE

Santa Rosa

Jornada; Jornada de Ciencia y Técnica 2021; 2021

Universidad Nacional de La Pampa

Elprotozoo Tritrichomonasfoetuses el agente causal de la tricomonosis bovina El diagnóstico de T.foetusen muestras de campo se basa en técnicas microbiológicas omoleculares como PCR o q-PCR. La técnica de cultivo es económica,mientras que las moleculares requieren insumos y equipamientocostosos. La amplificación isotérmica de ADN mediada por bucles(LAMP) ha sido utilizada para el diagnóstico de una gran variedad deenfermedades. Esta técnica puede ser llevada a cabo rápidamente conescaso equipamiento y mínimo entrenamiento de personal, y alcanzaruna elevada sensibilidad y especificidad. En el LAMP se emplea unaenzima ADN polimerasa que permite la amplificación isotérmica y esmuy refractaria a inhibidores presentes en las muestras biológicas.Estas razones hacen posible la amplificación específica de ADN sinpurificación previa. El diagnóstico de T.foetuspuede realizarse a partir de muestras de moco cervico-vaginal (MCV).Sin embargo, la matriz de la muestra dificulta su manipulación yhace necesario el procesamiento previo para poder realizar ladetección. El objetivo de este trabajo es diseñar un procedimientorápido y simple para realizar la detección mediante LAMP de T.foetusen muestras de MCV bovinas.Lasreacciones de LAMP que amplifican fragmentos de los genes ef1ay beta tubulina 2 fueronempleadas para el diagnóstico de T.foetusen muestras de MCV de campo. Con el propósito de facilitar lamanipulación de las muestras de MCV, fueron diluidas en agua ytratadas proteinasaK.Ladetección mediante LAMP fue realizada con calceína y MnCl2. Lasensibilidad de las reacciones en muestras de MCV fue de 0.1células/ul. Esto demostró que la técnica de LAMP resultó adecuadapara la detección a campo del protozoo.p { margin-bottom: 0.1in; direction: ltr; line-height: 115%; text-align: left; orphans: 2; widows: 2; background: transparent }