Análisis de péptidos y nucleósidos por electrocromatografía capilar empleando nanopartículas poliméricas como fase pseudoestacionaria

GRELA D; COLLAZO, D; VIZIOLI, NM

La Plata

Congreso; 8° Congreso Argentino de Química Analítica; 2015

Asociación Argentina de Químicos Analíticos

La electrocromatografía capilar (CEC) es una técnica separativa que combina la alta eficiencia de la electroforesis capilar y la selectividad de la cromatografía líquida de alta performance (HPLC). Generalmente, la CEC es llevada a cabo utilizando columnas empacadas, monolíticas o de tubo abierto. Sin embargo, el empleo de fases pseudoestacionarias (PSP) ha resultado una interesante alternativa, con las ventajas de no requerir empacado ni fritas. Las PSP aportan sitios de interacción y se mueven con (o contra) la fase móvil. Mediante el uso de PSP, la fase es continuamente reemplazada y para cada análisis se utiliza una columna enteramente renovada, lo que minimiza la necesidad de cambio de columna y evita la contaminación asociada a las matrices complejas, como ser las muestras biológicas [1,2].En este trabajo se presenta un método que utiliza nanopartículas poliméricas como PSP en CEC con detección de absorbancia en el ultravioleta. Las nanopartículas fueron preparadas mediante polimerización-precipitación de ácido metacrílico y etilenglicoldimetacrilato a 60° C, utilizando peróxido de benzoílo como iniciador. La reacción fue monitoreada por espectroscopía infrarroja. El producto se caracterizó por dispersión de luz dinámica y microscopía electrónica de transmisión. Para los ensayos por CEC, las nanopartículas se utilizaron adicionadas en la muestra, como aditivo en el electrolito de corrida (fase móvil), o bien, realizando un llenado parcial del capilar de separación previo a la introducción de la muestra. El electrolito consistió en una solución de acetonitrilo: buffer fosfato de sodio 20 a 50 mM, ajustado a pH entre 3,0 y 7,5 con trietanolamina, 9:1, v/v. El voltaje aplicado varió entre 10 y 20 kV, y la corriente generada en cada caso fue constante durante todas las corridas. Fue posible la separación, aunque incompleta, de los nucleósidos adenosina, guanidina, timidina y citidina. La repetibilidad se evaluó en función del RSD del tiempo de migración resultando inferior a 4% (n=5).Por otra parte se logró separar una mezcla de cinco péptidos sintéticos (bradiquinina, angiotensina I, hormona liberadora de la hormona luteinizante, oxitocina y metionin-encefalina) usando una suspensión de partículas en el electrolito constituido por acetonitrilo: solución de ácido fosfórico 25 mM, ajustado con trietanolamina a pH 3,3, 9:1, v/v. La repetibilidad del tiempo de migración fue inferior a un RSD de 3% (n=5). El método fue aplicado al análisis de un tripsinado de seroalbúmina bovina observándose un aumento de la resolución para los péptidos más básicos. Las nanopartículas estudiadas demostraron ser una útil herramienta para mejorar la eficiencia de separación en el análisis por CEC de biomoléculas tales como péptidos y nucleósidos.[1] Nilsson, C, Birnbaum, S, Nilsson S (2011). Electrophoresis, 32, 1142-1147.[2] Iacob, BC, Bodoki, E, Oprean, R (2014). Electrophoresis, 35, 2722-2732.