Control de pureza de péptidos por electroforesis capilar con preconcentración en línea: comparación de los perfiles obtenidos en diferentes sistemas electroforéticos

VIZIOLI NM; RUSELL ML; GUZMAN NA; CARDUCCI CN

Buenos Aires, Argentina

Congreso; IX CONGRESO ARGENTINO DE FARMACIA Y BIOQUÍMICA INDUSTRIAL; 2002

Durante la última década los compuestos peptídicos han registrado una creciente demanda como agentes terapéuticos y de diagnóstico. Al mismo tiempo, los entes regulatorios exigen un control cada vez más estricto de su pureza. Si bien tradicionalmente la técnica de elección para tal fin ha sido el HPLC, la electroforesis capilar (CE), es una microtécnica de ventajosas características de performance con alta resolución, gran versatilidad y empleo de pequeñas cantidades de muestra que se ha transformado en una técnica alternativa, complementaria y hasta competitiva de los métodos convencionales. Por esta razón, el objetivo de este trabajo ha sido establecer los perfiles de impurezas de péptidos sintéticos tales como angiotensina I, oxitocina, bradiquinina y hormona liberadora de la hormona luteinizante (LHRH), utilizando la técnica de CE con preconcentración en línea. Los concentradores de analitos fueron preparados en el laboratorio y se empacaron con material cromatográfico de fase reversa (sílica-C18) entre fritas de material polimérico. Dados el marcado crecimiento y la aplicabilidad de la espectrometría de masas como detector para la cromatografía líquida y la CE es que se han evaluado solventes compatibles con esta metodología para comparar los resultados con aquellos obtenidos con sistemas optimizados para detección UV. Se ensayaron dos sistemas electroforéticos: a) buffer fosfato 25 mM, pH 3.5 como electrolito de corrida, y acetonitrilo:buffer, 75:25, v/v, como solvente de elución; y b) ácido fórmico 25 mM en metanol 3%, pH 2.3, como electrolito de corrida, y acetonitrilo:agua, 80:20, v/v, como eluyente, sistema compatible con detección por espectrometría de masas. La muestra se introdujo por inyección hidrostática. Luego del lavado y acondicionamiento de la columna capilar con electrolito de corrida, los analitos retenidos en el concentrador fueron eluidos y monitoreados a 214 nm. Con ambos sistemas electroforéticos se logró la concentración y separación del componente principal y de las impurezas presentes en cada muestra con un incremento en la detectabilidad de 100 a 200 veces y una mayor selectividad con respecto a la CE libre. El método de preconcentración en línea con CE demostró ser sumamente ventajoso para el análisis del perfil de impurezas de los péptidos ensayados. Esta técnica promete ser una útil herramienta para el control de pureza de péptidos sintéticos, con la posibilidad de emplear la detección por espectrometría de masas.