Análisis de péptidos empleando microcolumnas monolíticas modificadas con hierro-protoporfirina

YONE A; PEREZ SE; VIZIOLI NM

CABA

Jornada; Encuentro Nano-Mercosur 2007; 2007

FUNDACION ARGENTINA DE NANOTECNOLOGIA

El uso de compuestos de afinidad para la selección específica en línea de analitos presentes en muestras complejas previamente a su análisis por electroforesis capilar ha recibido un creciente interés en los últimos tiempos, especialmente en el análisis de péptidos y proteínas. En este trabajo se propone un método de preconcentración usando un soporte monolítico para la retención del decapéptido angiotensina I y su subsecuente separación por electroforesis capilar zonal (CZE). Las microcolumnas monolíticas fueron preparadas en capilares de sílica fundida de 150 um de diámetro interno (d.i.) mediante polimerización in situ de una mezcla de dietilenglicoldimetacrilato (DEGDMA) y glicidilmetacrilato (GMA), iniciada y mantenida por irradiación sobre una fuente de 60Co, y luego químicamente modificadas con protoporfirina IX-Fe (Fe-ProP). Las microcolumnas monolíticas (8 mm de largo) se acoplaron próximas al extremo de introducción de la muestra del capilar de separación (75 um d.i. x 28 cm al detector). La angiotensina I fue eluida del microextractor empleando buffer fosfato 50 mM, pH 2.5 : ACN, 75 : 25 v/v y luego analizada por CZE con detección UV a 214 nm. El limite de cuantificación (CLOQ) fue de 0.5 ng/ml. El microextractor monolítico modificado con Fe-ProP y acoplado al capilar de separación mostró una alta capacidad de retención para el péptido angiotensina I, mostrando un aumento de 10.000 veces en la sensibilidad de detección en términos de concentración.