Estudio del efecto de la variación del pH en el comportamiento electroforético de

YONE A; VIZIOLI NM

Bahía Blanca, Pcia. de Buenos Aires

Congreso; V Congreso Argentino de Química Analítica; 2009

Asociación Argentina de Químicos Analíticos

Durante la última década ha crecido el interés en el uso de la electrocromatografíacapilar (CEC) para la caracterización de proteínas en aplicaciones de la proteómica asícomo también en el control de proteínas recombinantes [1]. En nuestro laboratorio sedesarrolló una columna para CEC modificada en su pared interna con hierro –deuteroporfirina para ser utilizada en la separación de péptidos y proteínas [2]. En estetrabajo se estudió el efecto de la variación del pH del buffer de corrida sobre laseparación de diferentes péptidos en la columna capilar modificada covalentemente conhierro – deuteroporfirina. Se analizaron soluciones de péptidos sintéticos (angiotensinaI, angiotensina II, bradikinina, hormona liberadora de la hormona luteinizante, oxitocina,metionin-encefalina e inhibidor de la angiotensina) y tripsinados de seroalbúminahumana (HSA). Las muestras se evaluaron en un rango de pH comprendido entre 3.5 y8.0 (buffer fosfato 25 mM conteniendo 5% de acetonitrilo e hidroquinona 10 mM). Lacolumna capilar fue de 35 cm de largo x 50 m de diámetro interno. Las separaciones sellevaron a cabo a 12 kV, 25°C, con detección UV a 214 nm. El tiempo de migración delos distintos péptidos varió para cada pH en forma predecible a partir de los valores depunto isoeléctrico de cada péptido, obteniéndose una separación óptima a pH 4.0. En elcaso del tripsinado de HSA se observó que los componentes de la muestra comenzabana separarse a mayor pH que los péptidos sintéticos (pH > 5.0) lográndose la mejorselectividad del sistema a pH 7.0. Los resultados obtenidos permiten resaltar laimportancia de la optimización del pH del buffer de corrida para cada muestra, aúncuando se trate de compuestos con las mismas características.