El efecto de drogas biosimilares al GLP-1 (Exenatida) en la adipogénesis de 3T3-L1.

GOJANOVICH, A. D.; BUSTOS, D. M.; DEL VELIZ, S.; UHART, M.; MASONE, D.; UHART, M.; BUSTOS, D. M.; DEL VELIZ, S.; MASONE, D.; GOJANOVICH, A. D.

San Luis

Jornada; VII Jornada de Bioquímica y Biología Molecular de Lípidos y Lipoproteínas.; 2017

Lospreadipocitos 3T3-L1 son célulasmurinas que se parecen morfológicamente y proliferan como losfibroblastos. En 1980, Adina K. Student y colaboradores publicaronsus investigaciones en preadipocitos 3T3-L1, clonados a partir defibroblastos embrionarios 3T3 de ratón, los cuales se cultivan enmonocapa y se induce su diferenciacióna célulascon característicasmorfológicasy bioquímicasde los adipocitos. Las3T3L1 se cultivan en medio DMEM (Gibco,Life Technologies, Denmark)suplementado con 10% Suero Fetal Bovino (SFB),1% L-Glutamina y los antibióticos penicilina y estreptomicina. Lascélulasamplificadas en cultivo son almacenadas en nitrógenolíquido,o utilizadas directamente para los experimentos. Para ladiferenciaciónadipogénicase utiliza un Medio de Diferenciación Adipogénico (MDA)compuesto de DMEMcon 10% SFB, 250nM Dexametasona, 10µg/ml Insulina Bovina, 0,5mM IBMXy 2µM Rosiglitazona, pormedio de un tratamiento de 48 hs. Lasvacuolas lipídicasse evidencian por tincióncon Redoil O.Elobjetivo de este ensayo fue evaluar el efecto de drogas biosimilaresal GLP-1 (glucagon-like peptide 1) en la adipogénesis de 3T3-L1. ElGLP-1 es una hormona intestinal con carácter de incretina, queaumenta su secreción tras la ingestión de alimentos,fundamentalmente azúcares y grasas, y provoca una inmediatarespuesta del páncreas, estimulando la secreción de insulina einhibiendo la de glucagón. El valor del papel potencial terapéuticodel GLP-1 no sólo en la diabetes sino también en la obesidad y enlas enfermedades cardíacas y nerviosas, es un hecho cuyo mecanismode acción concreto, no del todo conocido, requiere aclaración(Valverde et al., 2006). La Exenatida es un péptido biosimilar alGLP-1 que funciona como agonista del receptor de GLP-1 (GLP-1R). Éstase une y activa al receptor de GLP-1 humano también in vitro,estando su mecanismo de acción mediado principalmente por el AMPc,estimulando muchas vías de señalización intracelular. Eneste experimento se utilizó como control negativo 3L3-L1 cultivadascon DMEM suplementado con 2,5% de SFB. En cambio, como controlpositivo utilizamos 3T3-L1 cultivadas con el medio MDA,puesto a punto en nuestro laboratorio. También se realizarondiferentes experiencias en donde se buscó evaluar el potencial dediferenciación de GLP-1. Para ello las células se cultivaron en unMedio de Inducción a Prueba 1 (MIP-1)que contenía las mismas drogas que el MDA pero se reemplazó IBMXpor GLP-1, y también se utilizó un MIP-2que también contenía todas las drogas que el MDA pero se reemplazóinsulina por GLP-1.Elcontrol negativo, NO TRATADO (célulascon DMEM SFB 2,5%)presentóuna diferenciación basal debido a la alta confluencia celular.MDA (célulascon MDA), presentó la formaciónde vacuolas lipídicasen casi todas células,salvo algunas excepciones y esto nos permitió su uso como referenciapara comparar las demáscondiciones de diferenciación.La tincióncon Red Oil O nos permitió visualizarpequeñasvacuolas y otras de mayor tamaño en la mayoríade las células.MIP-1(célulascon MDA, reemplazando IBMX por exenatida 1μg/mL)presentó mayor cantidad de célulascon vacuolas lipídicas,la tinción con Red Oil O nos permitió la visualización en sumayoríade vacuolas pequeñas, presentes en casi todas las células,con una distribución homogénea.MPI-2(célulascon MDA, reemplazando insulina por exenatida 1μg/mL)presentóla formaciónde vacuolas lipídicasde tamañopequeño en comparación con las otras dos condiciones, con unadistribución similar a lo observado en MDA. Estonos permite concluir que el GLP-1 es un inductor de la adipogénesisen 3T3-L1, lo que concuerda con lo propuesto por Yang y colaboradores(Yang et al., 2013) quienes encontraron que el GLP-1 eleva losniveles de expresiónde la proteínade uniónde ácidosgrasos libres (aP2) y PPARγdeuna manera dosis-dependiente durante la diferenciación depreadipocitos 3T3-L1. Porotro lado, Cantini,G.,y colaboradores indican que el uso de un agonista del receptor deGLP-1, reduce la expansión del tejido adiposo disfuncional,favoreciendo una correcta adipogénesisde los adipocitos funcionales. Esto se debe a su capacidad de formarpequeñasvacuolas lipídicasen las célulasmadre diferenciadas, disminuyendo la masa grasa de los adipocitos yaumentando el metabolismo de lípidos,lo cual pudo ser observado en nuestros ensayos al reemplazar IBMX xEXENATIDA en MIP-1.Porotro lado, estos resultados nos hacen pensar que el receptor de GLP-1se expresaríadurante la diferenciación de manera inducible, y que la insulinapodríadesencadenar la expresión del receptor. Para esteúltimoanálisis,será necesaria la realización de PCR en tiempo real para obtenerresultados cuantitativos. p { margin-bottom: 0.25cm; direction: ltr; color: rgb(0, 0, 10); line-height: 120%; text-align: left; }p.western { font-family: "Times New Roman", serif; font-size: 12pt; }p.cjk { font-family: "Arial Unicode MS"; font-size: 12pt; }p.ctl { font-family: "Times New Roman"; font-size: 12pt; }a:link { color: rgb(0, 0, 0); }