DESARROLLO DE CONSTRUCCIONES ENDOMETRIALES TRIDIMENSIONALES (3D) Y CULTIVOS CELULARES DECIDUALIZADOS PARA EL ESTUDIO DE IMPLANTACIÓN EMBRIONARIA Y PATOLOGÍAS ENDOCRINAS HUMANAS.

OVIEDO MF; GANIEWICH D; CARNOVALE NR; OPPENHEIMER F

Buenos Aires

Congreso; IV REUNION CONJUNTA DE SOCIEDADES DE BIOLOGÍA DE LA REPÚBLICA ARGENTINA; 2020

DESARROLLO DE CONSTRUCCIONES ENDOMETRIALES TRIDIMENSIONALES (3D) Y CULTIVOS CELULARES DECIDUALIZADOS PARA EL ESTUDIO DE IMPLANTACIÓN EMBRIONARIA Y PATOLOGÍAS ENDOCRINAS HUMANAS. Carnovale N 1, Oviedo MF 1, Ganiewich D 1, Oppenheimer F 2, Leirós GJ 2, Olivares C 1, Bilotas M 1, Meresman GF 11Instituto de Biología y Medicina Experimental (IBYME-CONICET), 2ICT Milstein (FPC-CONICET), Buenos Aires, ArgentinaE-mail: nrcarnovale@gmail.comLa diferenciación de los fibroblastos del estroma endometrial en decidua secretora, es una transformación necesaria para la correcta implantación embrionaria humana. La decidualización inadecuada constituye una de las causas del fracaso de la implantación y el consiguiente aborto espontáneo temprano del embrión. Los sistemas endometriales in vitro representan una herramienta útil para estudiar aspectos fisiológicos y fisiopatológicos de la biología reproductiva humana. Los objetivos de este trabajo fueron optimizar un modelo de decidualización in vitro utilizando la línea celular estromal endometrial humana (T-HESC) y desarrollar un sistema 3D que imite la arquitectura del endometrio humano. El sistema 3D se desarrolló mediante la siembra de células T-HESC en colágeno bovino tipo I como sistema de andamiaje. Luego de la gelificación, se añadieron células epiteliales endometriales humanas (ECC-1) y se incubaron durante 7 días. Las construcciones fueron fijadas con formalina, embebidas en parafina y teñidas con hematoxilina-eosina. La expresión de citoqueratina se evaluó por inmunohistoquímica. La optimización del protocolo de decidualización in vitro se realizó utilizando células T-HESC con distintas concentraciones y combinaciones de cAMP, Medroxiprogesterona (MPA) y Estradiol en DMEM / F12 con distintos porcentajes de suero fetal bovino completo o charcolizado (cFBS) durante 7 o 9 días. Cada 3 días, se recogieron los medios condicionados y se renovaron el medio de cultivo y los estímulos. Diariamente se tomaron fotografías de todos los cultivos. Finalmente, las células se recolectaron para la extracción de ARN para su posterior análisis. En el sistema 3D se observaron células t-HESC alargadas y extendidas incorporadas al andamiaje, así como contracción del colágeno generado por las células estromales. Además se visualizó, una capa de células epiteliales de tipo estratificado que intentaron penetrar en la matriz del estroma, indicando el comienzo de la formación espontánea de glándulas. Por otro lado, la optimización de la decidualización resultó exitosa cuando se partió de 80 % de confluencia utilizando DMEM / F12 + 10% de cFBS en presencia de cAMP 0,5 mM, MPA 10−6M y Estradiol 10−8M. A partir de estos datos podemos sugerir que se logró mimetizar un principio de estructura endometrial en las construcciones 3D y que el andamiaje de colágeno proporcionó un ambiente adecuado para el crecimiento celular endometrial y la formación de glándulas. Este desarrollo innovador junto con la optimización del protocolo de decidualización artificial de t-HESC, aportan nuevas e importantes herramientas para estudiar los mecanismos involucrados en el proceso de implantación humana y el impacto de patologías endocrinas en la salud endometrial.AREA TEMÁTICA: BIOLOGÍA DEL DESARROLLO Y REPRODUCCIÓN (DR)