Efecto cooperativo entre Heparina y Glutatión durante la descondensación del espermatozoide humano in vitro.

JULIANELLI VL; M ROMANATO; CALVO L; CALVO JC

San Pablo, Brasil

Congreso; XXI Reunión Bienal de la Asociación Latinoamericana de Investigadores en Reproducción Humana; 2009

ALIRH

Introducción: La descondensación nuclear, que tiene lugar ni bien el espermatozoide penetra al ooplasma, involucra dos procesos: la reducción de los puentes disulfuro de las protaminas espermáticas y su reemplazo por histonas ovocitarias. En el espermatozoide humano, la tiorreducción estaría llevada a cabo por el GSH ovocitario y el heparán sulfato, también presente en el ooplasma, funcionaría como aceptor de protaminas. Se ha propuesto que la tiorreducción y el intercambio de protaminas por histonas ocurren in vivo en forma sucesiva e independiente. Objetivos: Estudiar la posible interacción entre tiorreductor y aceptor de protaminas durante la descondensación de espermatozoides humanos in vitro. Métodos: Se utilizaron muestras de semen de donantes normospérmicos (OMS). Espermatozoides lavados solamente, seleccionados por swim-up y capacitados y núcleos aislados se incubaron en medio HTF- BSA conteniendo heparina 46µM + GSH 10mM a 37°C, agregando los reactivos en forma simultánea (60’ espermatozoides; 30’ núcleos) o secuencial: GSH (30’ espermatozoides; 15’ núcleos) + lavado + heparina (30’ espermatozoides; 15’ núcleos) y viceversa. Se determinó el % espermatozoides descondensados (%Des) al microscopio de contraste de fase. Resultados: En espermatozoides lavados, el uso secuencial de heparina y GSH disminuyó significativamente %Des independientemente del orden en que se colocaran los reactivos: DesR (%Des relativa a la %Des obtenida con heparina + GSH 60’) 56±5% y 44±14% para heparina y GSH primero, respectivamente (n=4, ANOVA + Tukey, p<0,05). El mismo comportamiento pudo observarse en núcleos aislados: DesR 36±10%  para heparina primero y 32±20% para GSH primero (n=3, ANOVA + Tukey, p<0,05). Sin embargo, en espermatozoides seleccionados y capacitados, DesR descendió significativamente sólo al utilizar primero GSH: 51±10% (n=3, ANOVA + Tukey, p<0,05). La magnitud de la descondensación alcanzada fue semejante para espermatozoides lavados o capacitados al incubarlos con ambos agentes simultáneamente o con GSH primero mientras que los espermatozoides capacitados presentaron mayor grado de descondensación que los lavados al incubarlos secuencialmente con heparina primero: DesR 94±7% vs 41±9% (n=3, ANOVA + Tukey, p<0,05). Conclusión: Los resultados obtenidos sugieren que in vitro existe un efecto cooperativo entre aceptor y tiorreductor de protaminas, observable tanto en espermatozoides enteros como núcleos aislados. Este efecto se transformaría simplemente en un efecto facilitador de la heparina sobre la acción del GSH en espermatozoides capacitados, reflejando diferencias a nivel de membrana entre espermatozoides lavados y capacitados. Proponemos que tiorreducción y reemplazo de protaminas serían procesos simultáneos más que secuenciales durante la descondensación del núcleo espermático in vivo.