AISLAMIENTO DE CÉLULAS ESTROMALES DE TEJIDO DE MAMA HUMANO Y DIFERENCIACIÓN A ADIPOCITOS. OBTENCIÓN DE SOPORTES ESTROMALES Y REGULACIÓN DE LA PROLIFERACIÓN DE CÉLULAS EPITELIALES MAMARIAS NORMALES Y TUMORALES CRECIDAS SOBRE ELLOS

PISTONE CREYDT V; SACCA P; CALVO JC

Mar del Plata, Argentina

Congreso; LIII Reuni¨®n Cient¨ªfica de la Sociedad de Investigaci¨®n Cl¨ªnica (SAIC); 2008

SAIC

Las c¨¦lulas estromales afectan el crecimiento y la capacidad metast¨¢sica de c¨¦lulas tumorales. Los adipocitos son el tipo de c¨¦lulas estromales predominantes en tejido mamario y regulan caminos metab¨®licos. El objetivo fue obtener cultivos primarios de c¨¦lulas estromales de tejido adiposo normal de mama humano (CEMH), ensayar diferentes protocolos de diferenciaci¨®n a adipocitos y evaluar la regulaci¨®n de dichos soportes estromales sobre la proliferaci¨®n de l¨ªneas celulares epiteliales normales (NMuMG, murina) y tumorales (LM3, murina; T47D humana). Obtuvimos CEMH de tejido de mama de pacientes que fueron operados por razones est¨¦ticas (consentimiento informado). Ensayamos varios protocolos de diferenciaci¨®n a adipocitos y demostramos que incubando CEMH al 100% de confluencia por 3 d¨ªas con 1¦ÌM dexametasona y 500¦ÌM MIX, seguidos por 7 d¨ªas de incubaci¨®n con 1¦ÌM biotina y 2¦ÌM insulina, las c¨¦lulas se diferenciaron a adipocitos en un 70% respecto al control (CEMH 75% de confluencia, p<0,05). Cuantificamos la cantidad de l¨ªpidos acumulados en adipocitos por tinci¨®n con Red Oil a DO490nm. Luego evaluamos el efecto de los soportes estromales de CEMH sobre la proliferaci¨®n de NMuMG, LM3 y T47D, por MTS. CEMH crecidas a 75% de confluencia o diferenciadas se irradiaron y sobre ellas se hicieron crecer las l¨ªneas epiteliales. A las 24h, la proliferaci¨®n de las tres l¨ªneas celulares creciendo sobre CEMH 75% aument¨® respecto al control (p<0,05); mientras que sobre CEMH diferenciadas, solamente NMuMG mostr¨® un aument¨® significativo (p<0,05). Sin embargo, a las 48h las tres l¨ªneas celulares aumentaron su proliferaci¨®n al crecer sobre este ¨²ltimo soporte.Establecimos las condiciones para el mantenimiento y diferenciaci¨®n a adipocitos de CEMH. Adem¨¢s, diferentes estadios de CEMH modularon diferencialmente el crecimiento de las c¨¦lulas epiteliales. Presentamos un modelo que nos permitir¨¢ estudiar la interacci¨®n matriz-epitelio a partir de c¨¦lulas estromales y/o epiteliales humanas.