Participación del zinc en la asociación de la proteína CRISP1 al espermatozoide durante la maduración

89. MALDERA JA, VASEN G, COHEN DJ Y CUASNICU PS

Mar del Plata

Congreso; LIII Reunión Anual de la Sociedad Argentina de Investigación Clínica (SAIC).; 2008

SAIC

La proteína CRISP1 (Proteínas Secretorias Ricas en Cisteínas), se sintetiza en el epidídimo y se une a los espermatozoides mientras los mismos maduran durante su tránsito por este órgano. Resultados de nuestro grupo indican la existencia de dos poblaciones de CRISP1 sobre la gameta madura: una débilmente unida, removible por fuerza iónica, que se pierde durante la capacitación, y otra que permanece fuertemente unida y participa en fertilización. Sin embargo, aún se desconocen los mecanismos involucrados en la interacción entre CRISP1 y el espermatozoide. Teniendo en cuenta la alta concentración de Zn2+ en el fluido epididimario, y su capacidad de unirse a grupos sulfhidrilos, investigamos la participación de este catión en la asociación de CRISP1 al espermatozoide durante la maduración. Para ello, espermatozoides inmaduros obtenidos de la cabeza del epidídimo de rata, fueron incubados in vitro con fluido del cauda epididimario en presencia de Zn2+, analizándose la asociación de CRISP1 a las células mediante la preparación de extractos proteicos y el empleo de anti-CRISP1 en ensayos de Western blot. Los resultados mostraron que CRISP1 fue detectada en extractos de espermatozoides incubados con Zn2+ pero no así con Mg2+ o con Zn2+ junto al agente quelante EDTA. La asociación de CRISP1 en presencia de Zn2+ también se evidenció al emplear CRISP1 purificada. Asimismo, la proteína asociada fue posteriormente removida tanto por tratamiento con EDTA como por fuerza iónica (NaCl 0.6 y 2M). Finalmente, y como otra aproximación al tema, se realizaron estudios en espermatozoides maduros del cauda epididimario, observándose que mientras el tratamiento con EDTA logra remover parte de CRISP1 de las gametas, la presencia de Zn2+ durante la capacitación inhibe la liberación de CRISP1 durante este evento. En conjunto, estos resultados apoyan la participación del Zn2+ en la asociación de CRISP1 al espermatozoide que ocurre durante la maduración epididimaria.