Primeros indicios de la presencia de heparán sulfato, posible agente descondensante del espermatozoide humano in vivo, en el ovocito

ROMANATO M, REGUEIRA E, ZAPPI M, DE DIOS C, CALVO L Y CALVO J.C

Buenos Aires

Congreso; XX Reunión Bienal de la Asociación Latinoamericana de Investigación en Reproducción Humana; 2007

ALIRH

PRIMEROS INDICIOS DE LA PRESENCIA DE HEPARAN SULFATO, POSIBLE AGENTE DESCONDENSANTE DEL ESPERMATOZOIDE HUMANO IN VIVO, EN EL OVOCITO Romanato M1; Regueira E1; Zappi M1; De Dios C1; Calvo L1; Calvo JC1,2. 1Instituto de Biología y Medicina Experimental (IByME), Buenos Aires, Argentina. 2Facultad de Ciencias Exactas y Naturales (FCEyN), Buenos Aires, Argentina. Los espermatozoides humanos se descondensan in vitro con heparina (Hep) y glutatión (GSH). Estudios previos de nuestro laboratorio indican que in vitro, el heparán sulfato (HS), análogo estructural de Hep, pero no así otros glicosaminoglicanos (GAGs), presenta actividad descondensante similar a Hep y hemos propuesto que HS actuaría in vivo como aceptor de protaminas. El objetivo de este trabajo fue investigar mediante dos estrategias distintas la presencia de HS en el ovocito. Se utilizaron espermatozoides capacitados provenientes de muestras de donantes normospérmicos (OMS) y ovocitos frescos obtenidos de ratonas CF1 de 8 semanas estimuladas hormonalmente con PMSG (5 UI) y hCG (5 UI). Se recuperaron los ovocitos del oviducto y se eliminaron células del cúmulus (hialuronidasa 0,1% en PBS) y zona pelúcida (Tyrodes ácido, pH 2,5). 1) Ovocitos fijados con metanol se marcaron con Rubipy (Cloruro de tris (2,2´-bipiridina) Rutenio (II)) 1 mg/ml en agua destilada a pH 1,5 (marcación específica de grupos sulfato). 2) Se descondensaron espermatozoides in vitro entre porta y cubreobjetos en presencia de Hep 46 uM + GSH 10 mM u ovocitos rotos por presión mecánica + GSH 10 mM, durante 3,5 h. Como control, se descondensaron espermatozoides en tubo en las condiciones habituales (Hep/GSH). 1) El análisis por microscopia confocal reveló localización citoplasmática de HS en el 100% de los ovocitos observados. 2) No se encontraron diferencias significativas entre la descondensación de espermatozoides en presencia de ovocitos (55±7 %) vs. Hep + GSH (50±6 %, n=8, Paired Student, p=0.502). El agregado de heparinasa (10 mUI/ml) disminuye significativamente la capacidad descondensante de los ovocitos (16±13% vs 56±12%, n=4, Paired Student, p=0.04). En cambio no se observó efecto alguno ante el agregado de condroitinasa ABC (100 mUI/ml) (48±11% vs 54±8%, n=4, Paired Student, p=0.528) o hialuronidasa (2 UI/ml) (39±8% vs 42±7%, n=4, Paired Student, p=0.716). Estos resultados constituyen las primeras evidencias en la literatura acerca de la presencia de HS dentro del ovocito y reafirman nuestra hipótesis de trabajo: que el HS sería el aceptor de protaminas durante la descondensación del espermatozoide humano in vivo.