Participación de los epididimosomas en el mecanismo de asociación de “DE” al espermatozoide

MALDERA JA, FORNÉS MW, COHEN DJ Y CUASNICÚ PS

Buenos Aires, Argentina

Congreso; XX Reunión Bienal de la Asociación Latinoamericana de Investigadores en Reproducción Humana (ALIRH); 2007

Asociación Latinoamericana de Investigadores en Reproducción Humana (ALIRH)

La proteína epididimaria de rata DE se asocia a la superficie del espermatozoide durante la maduración existiendo una población mayoritaria débilmente unida que se libera durante la capacitación, y otra fuertemente unida que permanece luego de la reacción acrosomal y participa en el proceso de fusión espermatozoide-ovocito. Mientras que la primera población se encuentra asociada por interacciones electroestáticas, se desconoce el mecanismo de unión de la DE fuertemente unida. Recientes evidencias indican que la transferencia de proteínas integrales al espermatozoide estaría mediada por vesículas membranosas presentes en el fluido epididimario denominadas epididimosomas, por lo cual el objetivo del presente trabajo ha sido estudiar la participación de los mismos en la asociación fuerte de DE al espermatozoide. Para ello, fluidos epididimarios recuperados de cauda epididimario por perfusión desde el vaso deferente fueron sometidos a ultacentifugación, confirmándose la obtención de las vesículas por microscopía electrónica. La posible contaminación de la preparación con espermatozoides fue descartada por estudios de Western blot con anti-tubulina como marcador celular. Posteriores ensayos de Western blot con un anticuerpo específico contra DE confirmaron la presencia de la proteína en los epididimosomas. La asociación de DE a los mismos se estudió por extracción de proteínas con diferentes tratamientos y posterior evaluación de la presencia de DE en los extractos mediante análisis por Western blot, utilizando espermatozoides como control. Al igual que la población fuertemente unida a los espermatozoides, DE no fue removida de las vesículas por PBS, 2M NaCl, pH 3 o 5U/ml PLC-PI (fosfolipasa C específica para fosfatidilinositol), siendo totalmente extraída por pH 11, 250mM DTT (ditiotreitol) y 1% Tritón X-100. En conjunto, estos resultados demuestran la existencia de la proteína DE en los epididimosomas, la cual se comportaría, al igual que la población fuertemente unida a los espermatozoides, como una proteína integral de membrana. Estas evidencias apoyarían la participación de dichas vesículas en el mecanismo por el cual DE se asocia fuertemente al espermatozoide durante su tránsito por el epidídimo.