GRK2 regula al receptor H2 a histamina en forma dependiente e independiente de su actividad de quinasa

NC FERNANDEZ, F GOTTARDO, C SHAYO, C DAVIO

Mar del Plata

Congreso; LII Reunión Científica de la Sociedad Argentina de Investigación Clínica; 2007

El receptor H2 a histamina (rH2) pertenece a la familia de receptores de siete pasos transmembrana y media su acción a través de la activación de la proteína G?s incrementando los niveles de AMPc. Luego de ser fosforilado y desensibilizado por GRK2 es internalizado y reciclado a la membrana celular. Reportes recientes indican que GRK2 puede modular a los GPCRs en forma independiente de su actividad quinasa, sugiriendo la acción del dominio regulador de proteínas G (RGS) presente en las GRKs. El objetivo de este trabajo es discriminar los procesos dependientes e independientes de la fosforilación por GRK2 en la regulación del rH2. Para ello, evaluamos la desensibilización, internalización y reciclado del rH2 en células COS7-rH2 y U937, transfectadas con una construcción dominante negativa para GRK2 (GRK2K220R) que carece de actividad quinasa pero presenta el resto de los dominios intactos. En células COS7-rH2 observamos que GRK2K220R disminuye en un 30% la respuesta de AMPc frente a 10 µM de amthamina (agonista H2). Luego de 60 min de tratamiento con amthamina la capacidad de respuesta del rH2 a un nuevo estímulo con el agonista fue del 25%, y del 5% en presencia de GRK2K220R. Por otro lado, observamos una menor respuesta de AMPc a amthamina en COS7-rH2 transfectadas con RGS2. Al evaluar los procesos de internalización y recuperación de sitios activos en membrana, observamos mediante ensayos de unión que GRK2K220R bloquea la internalización del rH2 y en consecuencia la resensibilización del mismo. Resultados similares fueron obtenidos cuando las células U937 que expresan endógenamente rH2 y GRK2 fueron transfectadas con GRK2K220R. Estos resultados indican que la fosforilación del rH2 es necesaria para la internalización y reciclado del mismo. Sin embargo, GRK2K220R es capaz de bloquear la respuesta del rH2 en forma similar a la proteína RGS2. En base a esto proponemos que la desensibilización del rH2 es mediada por el dominio RGS de GRK2.