Caracterización funcional de la proteína epididimaria CRISP1 a través del desarrollo de ratones knock out

DA ROS VG, MALDERA JA, COHEN DJ, VASEN G, WEIGEL MUÑOZ M, GELMAN DM, RUBINSTEIN M, EDDY EM, CUASNICÚ PS

Buenos Aires, Argentina

Congreso; V CONGRESO ARGENTINO DE ANDROLOGÍA; 2007

Sociedad Argentina de Andrologia (SAA)

La proteína epididimaria DE, identificada por nuestro laboratorio, y la proteína testicular Tpx-1 son miembros altamente homólogos de la familia CRISP (Cysteine RIch Secretory Protein) conocidos como CRISP1 y CRISP2, respectivamente. Diversas evidencias de nuestro grupo indican que ambas proteínas participan en el proceso de fusión de gametas a través de su unión a los mismos sitios complementarios en el ovocito. Con el fin de investigar más profundamente la participación de proteínas CRISP en la fertilización, generamos una línea de ratones carentes de CRISP1 que constituyen los primeros animales “knock out” (KO) para una proteína CRISP. La caracterización de estos animales indicó la total ausencia de CRISP1 en epidídimo y la expresión normal de CRISP2 en testículo. El apareo de los animales reveló que los machos KO no presentaban diferencias en su fertilidad respecto a los animales “wild type” (WT) o heterocigotas (HT) (número de crías promedio: KO 6.5, WT 7.3, HT 6.3). Posteriores estudios indicaron la ausencia de diferencias histológicas a nivel de los órganos reproductores, como así también en la motilidad o habilidad de los espermatozoides de sufrir la reacción acrosomal. La co-incubación in vitro de ovocitos con cúmulus y espermatozoides capacitados tampoco mostró diferencias en los porcentajes de fertilización (KO 79% vs WT/HT 75%, n=8). Sin embargo, el análisis  específico de la capacidad de fusión de los espermatozoides utilizando ovocitos sin zona pellucida, mostró una disminución significativa en el porcentaje de ovocitos penetrados (KO 46% vs WT/HT 64%, n=10, p<0.0001), la cual fue aún mayor bajo condiciones de competencia, inseminando con espermatozoides KO y control simultáneamente (KO 33% vs WT/HT 68%, n=4, p<0.0001). En conjunto, estos resultados apoyan la participación de CRISP1 en el proceso de fusión de gametas, sugiriendo que el homólogo funcional CRISP2 podría estar compensando la ausencia de CRISP1 como un mecanismo para garantizar el éxito de la fertilización.