Exclusi¨®n de AMPc y MRPs: nuevos blancos para terapias diferenciantes en leucemias

S COPSEL, C SHAYO, C DAVIO.

Mar del Plata

Congreso; LII Reuni¨®n Cient¨ªfica de la Sociedad Argentina de Investigaci¨®n Cl¨ªnica; 2007

Previamente hemos descripto que la duraci¨®n e intensidad de la respuesta de AMPc cumplen un rol fundamental en los procesos de proliferaci¨®n y diferenciaci¨®n de las c¨¦lulas leuc¨¦micas humanas U937. Resultados anteriores indican que dichas c¨¦lulas excluyen AMPc en forma tiempo y concentraci¨®n dependiente. Numerosos reportes indican que MRP4 y 5, miembros de la familia de prote¨ªnas de resistencia a multidrogas (MRPs) son capaces de excluir nucle¨®tidos c¨ªclicos como el AMPc y el GMPc. Por lo tanto, nos planteamos como objetivo evaluar la expresi¨®n de MRPs en las c¨¦lulas U937, su relaci¨®n con el proceso de exclusi¨®n de AMPc y la asociaci¨®n entre este mecanismo y los procesos de proliferaci¨®n y diferenciaci¨®n. Por medio de RT-PCR determinamos que las c¨¦lulas U937 expresan MRP2, 4 y 5. Por otro lado, en cin¨¦ticas de producci¨®n de AMPc inducidas por amtamina 10¦ÌM (activador de la v¨ªa del AMPc) en presencia de rolipram 10¦ÌM (inhibidor de la familia de PDE4) observamos una reducci¨®n del 58.3¡À4.0% en la exclusi¨®n de AMPc cuando las c¨¦lulas son pretratadas con probenecid 500¦ÌM (inhibidor de MRPs). Por ensayos de incorporaci¨®n de [3H]-timidina se determin¨® la inhibici¨®n de la proliferaci¨®n, siendo del 0.8% al tratar las c¨¦lulas con amtamina+rolipram y del 41.8% para amtamina+probenecid+rolipram (p<0.05). Ninguna de estas combinaciones result¨® t¨®xica para las c¨¦lulas. Por otro lado, ¨²nicamente el tratamiento con amtamina+rolipram+probenecid condujo a la expresi¨®n del marcador de diferenciaci¨®n monoc¨ªtica, CD88. Resultados similares fueron obtenidos al utilizar verapamilo, otro inhibidor de MRPs. En base a estos resultados podemos concluir que al inhibir la exclusi¨®n de AMPc mediada por MRPs logramos una marcada reducci¨®n de la proliferaci¨®n y un mayor grado de maduraci¨®n celular frente al tratamiento con agentes que aumentan los niveles de AMPc. Por lo tanto, la modulaci¨®n de MRPs podr¨ªa ser considerada un nuevo blanco para terapias diferenciantes en leucemias.