MRP4/ABCC4: nuevo blanco para la erradicación de las células madre leucémicas

SABRINA COPSEL ; JULIEN BEYRATH; ROB WOESTENENK; JEANNETTE CANY; ANDREA ZIBLAT; HARRY DOLSTRA; CARINA SHAYO; FRANS G.M. RUSSEL; CARLOS DAVIO

Mar del Plata

Congreso; LVIII Reunión Científica Anual de la Sociedad Argentina de Investigación Clínica (SAIC), Reunión Anual de la Sociedad Argentina de Fisiología 2013 y XLV Reunión Anual de la Sociedad Argentina de Farmacología Experimental.; 2013

SAIC

Las células madres leucémicas (LSCs) son fundamentales para la generación y perpetuación de la enfermedad leucémica y responsables de la refractariedad al tratamiento. Una estrategia terapéutica a fin de erradicar las LSCs consiste en interferir con su capacidad de auto-renovación induciendo su diferenciación. Hemos reportado en líneas celulares de leucemia mieloide aguda (AML) que el MRP4/ABCC4 regula los niveles de AMPc intracelular y su bloqueo tanto farmacológico como por shRNA, determina la inhibición de la proliferación y la inducción de diferenciación celular. Por lo tanto, el objetivo del presente trabajo consiste en evaluar la implicancia de la exclusión de AMPc vía MRP4 en la proliferación e inducción de diferenciación de las LSCs con el fin de fortalecer la postulación del MRP4/ABCC4 y la regulación de los niveles de AMPc como blanco terapéutico eficaz. Para ello, utilizando como modelo la línea celular de AML KG1a, detectamos por citometría de flujo que estas células contienen alrededor de 70% de LSCs (CD34+CD38-) y a su vez que expresan CD123, un marcador específico de LSCs. Luego de su separación por FACS se detectó en las LSCs la expresión de MRP4/ABCC4 tanto a nivel de mRNA como a nivel de proteína. Finalmente, evaluamos la expresión de los marcadores de diferenciación CD38 y CD11b al tratar a las LSCs con forskolina 10 µM (FK, activador de la adenilato ciclasa) y/o MK-571 50 µM (MK, inhibidor de MRP4) por 48 h. El tratamiento con FK o con MK induce la  expresión de CD38 (p<0.001 o p<0.05, respectivamente). Mas aún, el tratamiento conjunto (FK+MK) lleva no sólo a un aumento aún mayor en los niveles de CD38 (p<0.001) sino también al incremento en la expresión de CD11b (p<0.05). En conclusión, el bloqueo del MRP4 y el incremento en los niveles de AMPc inducen la diferenciación de las LSCs. Así, el transporte de AMPc vía MRP4 podría ser considerado como blanco terapéutico para la erradicación de las LSCs.