Cationes divalentes e hiperpolarización de espermatozoides

SANDRA BACHMANN; PATRICIA V. MIRANDA

Mar del Plata

Congreso; LIV Reunión Anual de la Sociedad Argentina de Investigación Clínica; 2006

Sociedad Argentina de Investigacion Clinica

La reacción acrosomal (RA) es un evento exocitótico necesario para la fertilización y depende de la presencia de Ca2+ en el medio. El espermatozoide debe hiperpolarizarce durante la capacitación para activar los canales de Ca2+ que se abrirán por la depolarización inducida por el ligando: la zona pelúcida (ZP). Estudios previos de nuestro laboratorio indican que el Sr2+ puede reemplazar al Ca2+ en varios eventos funcionales del espermatozoide pero no en la RA espontánea o inducida por ZP. Luego de observar que la diferencia estaría a nivel de la membrana plasmática, quisimos analizar su origen. Espermatozoides de hamster fueron purificados e incubados en medio TALP común o modificado (en el cual el Ca2+ fue reemplazado por Sr2+) suplementado con 3 mg/ml de BSA. En algunos casos, una vez completado el período de capacitación (3 hs de incubación), las células fueron resuspendidas en medio sin NaCl y depolarizadas por agregado de 60 mM KCl. La RA fue medida por microscopía óptica 30 minutos después del tratamiento o a tiempo final (6 hs de incubación). La depolarización de espermatozoides capacitados indujo la RA a valores similares en presencia de cualquiera de los dos iones (de 49±3 a 79±1% en medio con Ca2+, p<0,001 y de 15±2 a 70±2% en Sr2+, p<0,001). Por otro lado, la sola resuspensión de los espermatozoides capacitados en Sr2+ en un medio sin NaCl produjo un aumento en la RA (54±2, p<0,001 vs 15±2%), sugiriendo que el Na+ podría estar relacionado con la incapacidad del Sr2+ de sostener la exocitosis. El agregado de un inhibidor de la bomba de Na+ (amiloride, AM, 1 uM) a espermatozoides incubados en Sr2+, elevó la RA espontánea a niveles similares a los observados en Ca2+ (72±4 vs 78±4% para Sr2++AM y Ca2+ , p<0,001 vs. 16±2% para Sr2+, a las 6 hs). Estos resultados sugieren que los espermatozoides incubados en Sr2+ no estarían hiperpolarizados y revelan que el Ca2+ está involucrado en la regulación del potencial de membrana de los espermatozoides.