La activación transcripcional de NF-κB por el TNF requiere de las vías PI3K/Akt y JNK y del receptor de tipo 1 de TNF para inducir la proliferación de carcinomas mamarios

RIVAS M; CARNEVALE R; ROSEMBLIT C; BÉGUELIN W; CHARREAU E H; ELIZALDE, PV; SCHILLACI R

Mar del Plata, Argentina

Congreso; LI Reunión de la Sociedad Argentina de Investigación Clínica; 2006

Sociedad Argentina de Investigación Clínica

Previamente demostramos que el TNF induce la proliferación de células de cáncer de mama murino C4HD y humano T47D, a través de la activación de las vías p42/p44 MAPK, JNK y PI-3K/Akt. En este trabajo investigamos la participación de los TNFR1 y TNFR2 en la activación de las vías, en la inducción de NF-kB y en la proliferación celular. Utilizamos tres mutantes de TNF, con capacidad de unirse selectivamente al TNFR1 (R1-TNF), TNFR2 (R2-TNF) murinos o a ambos receptores (R1R2-TNF), y determinamos la activación de cada vía en células C4HD por Western blot (WB). El R1-TNF indujo una potente estimulación de p42/p44 MAPK, JNK y Akt, similar a la obtenida con R1R2-TNF y TNF wt. El R2-TNF activó a p42/p44 MAPK y débilmente  a JNK y Akt. En ensayos de proliferación por incorporación de timidina-[3H] el R1-TNF aumentó la proliferación en un 49,3 ± 0,1%, el R2-TNF en un 14,2 ± 0,1%, mientras que el R1R2-TNF indujo un efecto similar al del TNF wt. Para evaluar la actividad transcripcional de NF-kB, transfectamos de manera transiente a las células C4HD y T47D con una construcción kB-luc. El tratamiento con TNF indujo un incremento de 3,29 ± 0,30 y 3,94 ± 0,29 veces, respectivamente. El TNF indujo la fosforilación en Ser 32/36 de IkB y la translocación al núcleo de la subunidad p65 (RelA) de NF-kB (WB).El R1-TNF y el R1R2TNF provocaron una activación de NF-kB similar a la producida por TNF wt, mientras que el R2-TNF la activó 1,6 ± 0,2 veces. El bloqueo de JNK y Akt, con SP600125 y Ly294002 respectivamente, inhibió por completo la actividad transcripcional de NF-kB, mientras que el bloqueo de p42/p44 MAPK con PD98059 la inhibió en forma parcial en ambos tipos celulares. El TNF indujo un aumento de ciclina D1 y de Bcl-XL (WB), genes blancos del NF-kB. El tratamiento con Bay 11-7012, inhibidor de IkB, inhibió la expresión de estas proteínas y de la proliferación inducidas por TNF en células C4HD y T47D. Estos resultados demuestran que el TNF induce la proliferación de carcinomas mamarios principalmente a través del TNFR1 el cual activa Akt y JNK son esenciales para la activación de NF-kB. Éste a su vez, induce la proliferación a través de Bcl-XL y ciclina D1.