Participación del calcio y el citoesqueleto de actina en la exposición transitoria de fosfaditilserina en ovocitos activados.

CURIA A; STEIN P; SCHULTZ R; CUASNICÚ PS; COHEN DJ

Mar del Plata

Congreso; LVII Reunión Anual de la Sociedad Argentina de Investigación Clínica (SAIC); 2012

Sociedad Argentina de Investigación Clínica (SAIC)

La exposición de fosfatidilserina (PS) es un evento clave para distintos procesos celulares. Recientemente demostramos que PS también se expone transitoriamente en ovocitos de ratón activados por fertilización o partenogénesis. En este trabajo estudiamos el rol del citoesqueleto de actina y del calcio, ambos involucrados en la activación del ovocito, en la exposición de PS. Para ello, los ovocitos fueron tratados con CCD (citocalasina D, inhibidor de polimerización de actina) y activados con SrCl2. evaluándose la exposición de PS por incubación con ANX5-FITC y el estadio nuclear, con Hoechst. En paralelo se evaluó la exocitosis de gránulos corticales (EGC) por marcación del exudado cortical con LCA-TRITC. Los ovocitos reiniciaron la meiosis sin eliminar el 2do cuerpo polar y, al igual que aquellos incubados sin CCD, presentaron marca para LCA y ANX5. La coincidencia de ambas marcaciones sugería que la movilización de PS podría ocurrir como consecuencia de la EGC. Sin embargo, el hecho de que ovocitos activados con ionóforo de Ca2+ no presentaran exposición de PS pero una EGC normal, permitió descartar esta posibilidad. Para establecer el rol del Ca2+ en la exposición de PS, los ovocitos fueron incubados con BAPTA-AM (quelante intracelular de Ca2+) y activados con SrCl2 no observándose reinicio de meiosis ni marca de ANX5. Para determinar si la falta PS expuesta se debió a la falta de Ca2+ o al arresto en MII, se activaron ovocitos provenientes de ratones CaMKII, los cuales elevan Ca2+ sin reiniciar meiosis, detectándose marca de ANX5 similar a los controles. Consistentemente, ovocitos activados con TPEN, quelante de Zn2+ que induce el reinicio de meiosis sin elevar Ca2+, no presentaron marca para ANX5. En conjunto, los resultados indican que la exposición de PS en ovocitos no depende de la estabilidad del citoesqueleto de actina y requiere aumento de calcio intracelular, apoyando la potencial relevancia de este fenómeno para la activación del ovocito.