ESTUDIOS MORFOPATOLÓGICOS DE LOS RECEPTORES ALFA2 -ADRENÉRGICOS EN CÁNCER DE MAMA HUMANO Y EXPERIMENTAL.

LUTHY IA.

Tandil

Conferencia; X Congreso Argentino de Ciencias Morfológicas; 2006

Area de Ciencias Morfológicas, Un. Centro Prov. Bs. As.

ESTUDIOS MORFOPATOLÓGICOS DE LOS RECEPTORES  a2 -ADRENÉRGICOS EN CÁNCER DE MAMA HUMANO Y EXPERIMENTAL. Dra.Isabel Alicia LÜTHY. Instituto de Biología y Medicina Experimental IBYME-CONICET, Obligado 2490,Ciudad Autónoma de Buenos Aires, ARGENTINA, iluthy@dna.uba.ar Los compuestos adrenérgicos (epinefrina y norepinefrina) son las hormonas más importantes liberadas durante el estrés. Diferentes receptores están asociados con sus acciones en diferentes tejidos. Sin embargo, los receptores a2-adrenérgicos (RA-a2) no habían sido descriptos aún en tejido mamario humano normal ni tumoral. Nuestro grupo ha trabajado en la descripción y caracterización de estos receptores en diferentes líneas celulares de mama humana tumorales y no tumorales. Se analizó la expresión de RA-a2 a nivel de ARN mensajero por RT-PCR, observándose que las células tumorales IBH-6 e IBH-7, desarrolladas en el laboratorio a partir de muestras de tumores de pacientes, así como las células MCF-7 y las no tumorales HBL-100, expresaban tanto los subtipos a2B- como a2C. Las células malignas no sensibles a estrógenos HS-578T (a2A) y MDA-MB-231 y las no tumorales MCF-10A (a2B) expresaron un solo subtipo de receptores. Se realizaron ensayos de unión y competencia con un marcador radiactivo. Todas las líneas celulares analizadas exhibieron unión significativa del  antagonista específico [3H]-rauwolscina. Los compuestos a-, a2- y a1 con conocida afinidad por los RA-a2, incluyendo a la epinefrina, norepinefrina,  yohimbina, clonidina, rauwolscina y prazosin, mostraron afinidad por el receptor en células MCF-7. Se realizaron detallados estudios de inmunocitoquímica, en los que las células IBH-6, IBH-7 y MCF-7 mostraron marcación significativa con los anticuerpos específicos contra los subtipos de receptor a2B- y a2C-. Se pudo observar que el receptor del subtipo a2B- se encontraba en la membrana plasmática y también en el citoplasma, mientras que los del subtipo a2C- se hallaban casi siempre en forma intracelular. Se confirmaron estos resultados mediante inmunofluorescencia en microscopio confocal. En la línea IBH-6 se observó una marcación claramente perinuclear para el receptor  a2C-. Además, en todas las líneas celulares, un agonista específico incrementó la incorporación de [3H]-timidina a concentraciones en algunos casos fM. En todos los casos, el antagonista específico rauwolscina revirtió esta estimulación. Investigamos entonces la posibilidad de una acción "in vivo" de estos compuestos. Para ello se utilizaron dos modelos experimentales murinos. Uno de ellos fueron las líneas tumorales “in vivo” desarrolladas por la Dra. Claudia Lanari por administración crónica de acetato de medroxiprogesterona (MPA). La inyección de los agonistas clonidina y dexmedetomidina a tumores dependientes de MPA estimularon significativamente el crecimiento tumoral aún en presencia de esta hormona. El antagonista yohimbina además de revertir el efecto estimulatorio de clonidina, poseía un efecto agonista per se. En cambio, rauwolscina inhibió significativamente el crecimiento de tumores independientes de MPA (CC4-3-HI), comportándose como un agonista inverso. Se estudió la presencia de receptores por inmunocitoquímica en una línea celular proveniente de un tumor hormono-dependiente. Se encontró marcación significativa para los tres subtipos de RA-a2, los subtipos a2A- y a2B- fundamentalmente en la membrana, aunque con marcación intracelular y el subtipo a2C- intra­celular. El segundo modelo experimental utilizado fue ratones desnudos inoculados con las líneas IBH-4 e IBH-6 desarrolladas en nuestro laboratorio. Los mismos originan tumores pobremente diferenciados, con áreas sarcomatosas y altamente metastásicos. Cuando se inyectó clonidina a los ratones inoculados con células IBH-4, se produjo un incremento significativo del crecimiento tumoral, que fue reproducido en cultivo primario de células epiteliales, fibroblastos del tumor y co-cultivo de los mismos. En cambio en ratones inoculados con células IBH-6, aunque la rauwolscina y la combinación de rauwolscina y clonidina resultaron inhibitorios, la inyección de clonidina también lo fue. Al incubar los cultivos primarios de células epiteliales y de fibroblastos con clonidina la misma estimuló la proliferación celular. En cambio, cuando se realizaron co-cultivos, éstos reprodujeron lo hallado in vivo, remarcando la importancia del estroma en el crecimiento tumoral. Como conclusión, hemos descripto y caracterizado RA-a2 en células tumorales y no tumorales de mama humana, y hemos encontrado que los agonistas de estos receptores aumentan tanto la proliferación celular como el crecimiento tumoral. Hemos encontrado además antagonista a2-adrenérgico que es capaz de inhibir el crecimiento tumoral en todos los modelos estudiados. En todos los casos realizamos estudios inmunocitoquímicos y/o histológicos para analizar la localización subcelular de los receptores.