Efectos locales del bloqueo del sistema Notch por un inhibidor de gamma secretasa (DAPT) en la función del cuerpo luteo de ratas preñadas

HERNANDEZ F; IRUSTA G; TESONE M

Mar del Plata

Congreso; Reunión Anual de la Sociedad Argentina de investigación Clínica SAIC; 2010

Sociedad Argentina de investigación Clínica SAIC

La vía de señalización de Notch incluye una familia de receptores transmembrana (Notch1-4) que interactúan con ligandos específicos (familia Delta-like, Jagged1 y Jagged2) desempeñando un papel fundamental en la proliferación, crecimiento, diferenciación y apoptosis en tejidos embrionarios y adultos. Cuando el ligando se une a su receptor Notch, el dominio de transmembrana es procesado proteolíticamente por el complejo gamma secretasa, liberando al dominio intracelular que se transloca al núcleo y regula la expresión de factores de trascripción. En trabajos previos hemos demostrado que los receptores Notch1, 4 y el ligando Dll4 se expresan en el cuerpo lúteo (CL) de ratas preñadas y la administración de prostaglandina F2α disminuye los niveles de los ARNm y la expresión proteica. Nuestra hipótesis es que el sistema Notch regula en forma directa la función luteal durante la preñez en la rata. Se utilizaron ratas inyectadas intrabursa con el inhibidor de Notch DAPT (10 mg/ovario) o su  vehículo (Control) en el inicio de la regresión luteal (19 días de preñez) y se sacrificaron a las 24 hs. Se evaluó la función luteal midiendo los niveles de progesterona sérica (P4) por RIA, se aislaron los CLs por microdisección para medir proteínas pro y anti apoptóticas por Western. Además se estudió la localización de caspasa 3 mediante IHC. La inyección intrabursa con DAPT disminuyó los niveles de P4 (P<0.05, n= 5). Se observó un aumento en los niveles del fragmento activo de caspasa 3 medido por Western en el grupo DAPT comparado al grupo control (P<0.05, n=5) y sus células luteales mostraron marca nuclear más intensa para dicha caspasa. El tratamiento aumentó los niveles luteales de la proteína proapoptótica BAX y disminuyó los niveles de la proteína antiapoptótica BCL2, siendo la relación entre estas dos proteínas significativamente elevada en el grupo DAPT. Conclusión: Estos resultados sugieren que el sistema Notch tiene una función de supervivencia en el CL de rata preñada.