IBYME   02675
INSTITUTO DE BIOLOGIA Y MEDICINA EXPERIMENTAL
Unidad Ejecutora - UE
congresos y reuniones científicas
Título:
ROR1 ACTIVA LA VÍA DE SEÑALIZACIÓN DE WNT Y MEDIA LA SUPERVIVENCIA DE LAS CÉLULAS DE MELANOMA
Autor/es:
NATALIA BRENDA FERNÁNDEZ; DANIELA MARIANA LORENZO; PABLO LÓPEZ BERGAMI
Reunión:
Congreso; LV Reunión Científica Anual Sociedad Argentina de Investigación Clínica; 2010
Resumen:
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Melanoma se caracteriza por
la activación constitutiva de diversas vías de transducción de señales tales
como MAPK y PI3K/Akt. La
vía no-canónica de Wnt (independiente de
β-catenina) se encuentra activa en melanoma pero poco se sabe de los mecanismos intracelulares
involucrados. El objetivo de este trabajo es ampliar nuestro conocimiento sobre esta vía de
señalización. Para ello, se determinaron los niveles de ARN mensajero de los receptores
pertenecientes a las familias Fzd y Ror. Mediante
ensayos de PCR en tiempo real se demostró que Fzd7 y el receptor de tirosina quinasa
Ror1 se encuentran sobreexpresados en melanoma. Para
estudiar la importancia de la sobreexpresión de Ror1 en melanoma se diseñaron y
clonaron en el vector retroviral pRetroSuper dos short hairpin ARN (shRNA)
específicos contra Ror1. La transducción de células de melanoma Lu1205 con
estos retrovirus provocó una eficiente inhibición de Ror1 en ensayos de western
blot. La reducción en los niveles de Ror1 se asoció a una mayor inducción de
apoptosis por privación de suero (22,4% vs 13,4%) y por
tratamiento con Wnts. Para identificar mediadores intracelulares de la
señalización por Ror1 estudiamos la fosforilación y activación de Dvl2
(intermediario de la vía Wnt) por Wnt5a en las células Lu1205. Este experimento demostró que la
activación de Dvl2 por Wnt5a se encuentra disminuída cuando las células
expresan el shRNA de Ror1. Por otro lado, mediante ensayos de luciferasa con un
gen reportero cuyo promotor es activado por la vía dependiente de β-catenina y
utilizando Wnt3a (ligando canónico) como estímulo, observamos menores niveles
de estimulación en las células que expresan el shRNA de Ror1 con respecto al
control. En conjunto, estos resultados indican que la sobreexpresión de Ror1 en
melanoma estaría implicada en mecanismos de resistencia a apoptosis y a una mayor
actividad de las vías canónica y no-canónica de Wnt y que estos efectos
estarían mediados por Dvl2.